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【求助】HPLC 测量 tm 死时间

coolspring

2008/08/25

液相色谱（LC）

各位老师，本人在工作中遇到一个问题想请教大家，在使用液相色谱分离目标物质时，目标物的出峰时间很短，我大致计算了一下，应该是小于死时间的，这样的话是不是说这根色谱柱基本上和我的目标物没有发生什么相互作用就流出了？
我给出具体参数，大家帮我看看我算的对不对！
柱子是Agilent的反相液质柱，参数如下：2.1*150mm 5um 我使用的流速是200ul/min
我大致按照经验公式计算如下
Tm=(柱长度*柱截面积)/流动相流速
3.14*(0.21/2)2*15=0.519
0.519/0.2=2.60min
现在我的两个目标物质的出峰时间大约在2min，这样可以说这根柱子基本上没有分离我的目标物吗？
在此之前，我尝试了各种流动相和梯度，但是效果不明显。
我也找了本版的相关信息来看，但是对于别人提到的那个流速单位心存疑虑。
还望各位老师不吝赐教!
附上我找到的帖子：
在HPLC分析中死时间Tm的测量
在HPLC分析中，死时间Tm的测量是一个比较困难的问题，这也直接影响了高精度kovats保留指数在HPLC中的应用。死时间表示了一个在高效液相色谱固定相上未被滞留组分的保留时间，由于高效液相色谱立法的多样性，很难找到像气相色谱那样选择空气或甲烷为测量死时间的通用探针，其实平时分析时用这个死时间的意义不大，我觉得你知道就行！但我还是告诉大家如何来测。

1.由色谱柱的结构参数进行计算
Tm=(柱长度*柱截面积*总孔率)/流动相流速
其中柱长度为cm,柱截面积为cm2,总孔率(对全多孔固定相为0.84,对化学我键合和离子交换为0.75),流速cm3/s

2.用色谱柱的操作参数进行计算
Tm=(柱阻抗因子*流动相动力粘度*柱长度的平方)/(柱压力降*固定相粒径)

3.依据经验公式计算
(1)对全多孔固定相
Tm=(柱长度*柱内径的平方)/(1.5*流速)
(2)对非多孔固定相
Tm=(柱长度*柱内径的平方)/(3.0*流速)

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dickwang2008

第1楼2008/08/26

楼主，请问一下现在还有反相液质柱，没有听说过呢？给介绍一哈

0

zhx_fs_ln

第2楼2008/08/26

应助达人

Tm=(柱长度*柱截面积)/流动相流速?在什么地方找到的经验公式？你的柱子里面是空的么?死体积不会这么大吧。应该不是这么算

0

dickwang2008

第3楼2008/08/26

个人认为，你应该使用甲醇来测定你这个色谱柱的死时间吧

0

吃饱不饿

第4楼2008/08/26

我也觉得死时间不会有那么大，你手动掰一下六通阀触发采集，不必进样，然后放大1-2分钟的基线，如果有波动那个时间就是死时间，死时间在1-2分钟内应该是可以接受的

0

coolspring

第5楼2008/08/26

我是看到了前人发的帖子中提到的这个计算公式，当时总孔率我按照1来估算的，本人刚接触这些东西，问题很幼稚，请各位不吝赐教！

1.由色谱柱的结构参数进行计算
Tm=(柱长度*柱截面积*总孔率)/流动相流速
其中柱长度为cm,柱截面积为cm2,总孔率(对全多孔固定相为0.84,对化学我键合和离子交换为0.75),流速cm3/s

0

coolspring

第6楼2008/08/26

您好，可能是我的表述不清晰，我想说的是用在液质上的色谱柱，2.1的。
谢谢您的指点！

0

xiaokai9557

第7楼2008/08/27

算法有严重的问题,死时间怎么计算的你还需要重新学习学习.

0

rose_skyxie

第8楼2008/08/27

死时间是不死要和进样同等条件下测定啊？

0

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