【学习心得之三】AB液质培训 质谱(MS)massspectrometry李立军资料学习心得

8、LC-MS对LC的要求
1．不加热ESI的最佳流速是1—50 uL／min，应用4.6 mm内径LC柱时要求柱后分流，目前大多采用 l—2 mm内径的微柱，TIS源最高允许lmL/min，建议200-400 uL /min。
2．APCI的最佳流速～lmL／min，常规的直径4.6mm柱最合适。
3．LC-MS接口避免进入不挥发的缓冲液，避免含磷和氯的缓冲液，含钠和钾的成分必须＜lmmol/L。含甲酸（或乙酸）＜2％。含三氟乙酸≤0.5％。含三乙胺＜l％。含醋酸铵＜5~10mmol/L。
送样前一定要摸好LC条件，能够基本分离，缓冲体系符合MS要求。
4．总离子流（TIC）可以与UV图相对照，但不一定完全对应，特征离子的质量色谱在复杂混合物分析及痕量分析时是 LC-MS测定中最有用的谱图。
为了提高分析效率，常采用＜100 mm的短柱（此时UV图上并不能获得完全分离）。

9、样品的预处理
（1）为什么要进行样品的预处理
    认为LC-MS／MS不需要样品预处理的理解是片面的
    防止固体小颗粒堵塞进样管道和喷嘴
    获得最佳的分析结果。
    从ESI电离的过程分析：从ESI电离的过程分析：
    ESI电荷是在液滴的表面
    样品与杂质在液滴表面存在竞争
    不挥发物防碍带电液滴表面挥发
    带电离子进入气相
    大量杂质防碍带电样品离子进入气相状态
    大量杂质离子的存在增加电荷中和的可能
（2）样品的预处理常用方法
    a）超滤
    b）溶剂萃取／去盐
    c）固相萃取
    d）灌注（Perfusion）净化／去盐
    e）色谱分离
    反相色谱分离
    亲和技术分离
    f）沉淀蛋白

10、一些常见的加和离子
正离子方式常出现如下离子:
    -Na 22 Da. higher than M+H
    -K 38 Da. higher than M+H
    -Li 6 Da. higher than M+H
    -NH4 17 Da. higher than M+H
    -ACN 40 Da. higher than M+H
    2M+H,2M+Na等

负离子方式常出现如下离子:
    -TFA 114 Da. higher then M-H (113 and 227 background)
    -Acetate 60 Da. higher then M-H
    -Formic 46 Da. higher then M-H
    -Cl 36 Da. higher than M-H

2.影响分子量测定的因素
1）PH的影响
2）气流和温度
3）溶剂和缓冲液流量
4）溶剂和缓冲液的类型
5）选择合适的液相色谱类型
6）合适的电压
7）样品结构和性质
8）杂质的影响

LC-MS中常见的本底离子
    m/z 15-150, 溶剂离子，[(H2O)nH+，n= 3-112]
    m/z 102, H+乙腈 +乙酸, C4H7NO2H+,102.0549
    m/z 149, 管路中邻苯二甲酸酯的酸酐, C8H4O3H+,149.0233
    m/z 288, 2mm 离心管的产生的特征离子
    m/z 279, 管路中邻苯二甲酸二丁酯 C16H22O4H+, 279.1591
    m/z 316, 2mm 离心管的产生的特征离子
    m/z 384, 瓶的光稳定剂产生的离子
    m/z 391, 管路中邻苯二甲酸二辛酯, C24H38O4H+, 391.2843
    m/z 538, 乙酸+氧 +铁（喷雾管）, Fe3O(O2CCH3)6, 537.8793

分子量测定失败的原因
a）流动相不合适
b）不挥发性盐的影响
c）成分复杂，杂质太多
d) 样品浓度不够
e）pH值不合适
f）样品在源内分解或碎裂

    MRM可以看作两个SIR而且MRM在许多方面提供的特殊性比SIR还要好。
    MRM与SIR相似，得不到普通的质谱图，若要观看谱图，只能见到一种质量的峰；选用MRM代替SIR可以分析那些本底复杂的样品，还可排除可能会产生干扰的化合物。

不好意思，发出来和我写的差别很大，很多格式都变了，大家可以下载WORD版体会，版面我自己在慢慢维护好了，

非常感谢！正在学习此方面的知识！

楼主真细心！学习了，多谢·

有一点我有另外的看法。真空并不是越低越好，有些时候，维持相对的高压，反而有利于离子聚焦，而不会使离子信号减弱多少，且会获得更好的信噪比和线性。

maldi不是最新出来的吧，都有几年的历史了。

谢谢，正准备学习质谱呢，太感谢了。

写的很好，尤其是最后应用的那部分最好.

楼主的总结真的太好了，应该向你学习学习。