爱杰杰
第1楼2008/09/19
晕了,附件还发不出去。。我给大家黏贴上~~~
分子排阻色谱法测分子量
1 色谱条件
流动相: 2.84%硫酸钠溶液(用稀硫酸调节PH值至5.0),加入0.02%跌氮化钠
流速:0.5 ml/min, 波长:234nm
样品浓度:10mg/ml 标准品浓度:10mg/ml
2 操作步骤:
2.1 样品处理:准确称取50mg硫酸软骨素样品,置50ml容量瓶中,加入10ml水,超声处理10min使之完全溶解后,定容至刻度后用0.45μm滤膜滤过,备用。
2.2 标准品处理:取一支欧洲药典低分子量肝素分子量测定用对照品,加入相应的高纯水,配置浓度为10mg/ml。
2.3流动相:配制2.84%硫酸钠的水溶液(内含0.02叠氮化钠),用1mol/ml的硫酸调PH5.0,用0.45μm滤膜过滤。
2.4数据分析
(1)在脱机状态下,从“视图”菜单中,点击“数据分析”进入数据分析界面,从“文件”菜单选择“调用信号”选中所需的数据文件名,如“DATA/GPC070810”,点击“确定”
(2)从“GPC”菜单中,选择“GPC-Settings”,在“File”中选择“demo-gpc.CAL”,在“Refetence Detector for Recalibration”中选择“RID”,在“Report settings”中选择“Inter”
(3)从“Windows”中选择“Calibration”并在“GPC-Addon”软件菜单栏中点击“File” 选择“New”产生的校正文件,激活“elugram windows”切换回工作站并调入下一校正文件,从“GPC”中选择“Calculate GPC-Results”,将计算得到的相应分子量填入表格中,对于第3到第6个校正标准,重复此步骤。
当所有的校正标准都已经添加到校正表后,从“Windows”菜单中激活“Calibration”,点击“File”选择拟合曲线方式,曲线的质量通过选择“Campare”下拉菜单的Deviation来观察,理想的曲线拟合应该是偏差点随机分布在标准曲线的两侧,然后从菜单中点击“File”选择“Sare As”以“GPC-FIL”为例,作为文件名存盘。
(4)分析供试品,切换化学工作站并进入数据分析界面。“Data Analysis”从文件菜单中选择“调用信号”选中供试品的文件名。从“GPC”菜单中选择“GPC-Settings”在“File”中点击“Browse”选择做好的标准曲线文件“GPC-FIL.CAL”。在右侧“Report settings”处选中“Print results”,还可以在“Configure Print”处选择缺省打印机以及文本文件,并输入要报告的文本文件名,然后点击“ok”,从“GPC”菜单中选择“Calculate GPC-Results”,GPC-Addon软件将打开并已经设置好基线,使用新得到的校正曲线“GPC-FIL.CAL”对数据进行计算。打印预览结果会显示在计算机屏幕上,但可能不清楚。要想仔细查看结果,请在设置中选择打印机或通过文本文件来浏览。