平凡人
第1楼2009/01/06
二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液
电泳缓冲液
50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液
成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量
2mol/L Tris碱 242g
1mol/L 乙酸 57.1 ml的冰乙酸(17.4 mol/L)
100 mmol/L EDTA 200ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)
水 补足1L
5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液
成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量
445 mmol/L Tris碱 54g
445 mmol/L 硼酸盐 27.5g 硼酸
10 mmol/L EDTA 20 ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)
水 补足1L
染料
1%溴酚蓝(bromophenol blue)
加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
1%二甲苯青FF(xylene cyanole FF)
溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml。
10mg/ml的溴化乙锭(ethidium bromide)
小心称取1g溴化乙锭,转移到广口瓶中,加100ml水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管,于4℃贮存。
凝胶上样液(gel loading solutions)
6×碱性凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.3 N 氢氧化钠 300ul 10N 氢氧化钠
6 mmol/L EDTA 120ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
18%聚蔗糖(400型) 1.8g
0.15%溴甲酚绿 15mg
0.25%二甲苯青FF 25mg
水 补足到10ml
6×聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.15%溴酚蓝 1.5ml 1%溴酚蓝
0.15%二甲苯青FF 1.5ml 1%二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA 100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
15%聚蔗糖(400型) 1.5g
水 补足到10ml
6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.25%溴酚蓝 2.5ml 1%溴酚蓝
0.25%二甲苯青FF 2.5ml 1%二甲苯青FF
15%聚蔗糖(400型) 1.5g
水 补足到10ml
6×甘油凝胶上样液(4℃贮存)
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.15%溴酚蓝 1.5ml 1%溴酚蓝
0.15%二甲苯青FF 1.5ml 1%二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA 100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
50%甘油 3ml
水 3.9ml
6×蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.15%溴酚蓝 1.5ml 1%溴酚蓝
0.15%二甲苯青FF 1.5ml 1%二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA 100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
40%聚蔗糖 4g
水 补足到10ml
10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.2%溴酚蓝 20mg
0.2%二甲苯青FF 20mg
200 mmol/L EDTA 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
0.1%SDS 100ul 10% SDS
50%甘油 5ml
水 补足到10ml
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第2楼2009/01/06
三.常用培养基
LB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
蛋白胨 10g
酵母提取物 5g
氯化钠 10g
如果需要用1N NaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
SOB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
蛋白胨 20g
酵母提取物 5g
氯化钠 0.5g
1 mol/L 氯化钾 2.5ml
用水补足体积到1L。分成100ml的小份,高压灭菌。培养基冷却到室温后,再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。
SOC培养基
成分、方法同SOB培养基的配制,只是在培养基冷却到室温后,除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外,再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足够水中,再用水补足到100ml,用0.22um的滤膜过滤除菌)。
TB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
蛋白胨 12g
酵母提取物 24g
甘油 4ml
各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃,再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液(2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中,使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌)。
2×YT培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
蛋白胨 16g
酵母提取物 10g
氯化钠 4ml
如果需要用1N NaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
YPD培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
蛋白胨 20g
酵母提取物 10g
葡萄糖 20g
用水补足体积为1L后,高压灭菌。建议在高压灭菌之前,对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸,因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板,需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。
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第3楼2009/01/06
四.常用抗生素
氨苄青霉素(ampicillin)(100mg/ml)
溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
羧苄青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)
溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
甲氧西林(methicillin)(100mg/ml)
溶解1g甲氧西林钠于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml)
溶解100mg卡那霉素于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml)
溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml~25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
链霉素(streptomycin)(50mg/ml)
溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
萘啶酮酸(nalidixic acid)(5mg/ml)
溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
四环素(tetracyyline)(10mg/ml)
溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无水乙醇,定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光,于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。