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【讨论】请教 液相进样浓度的基本问题

液相色谱(LC)

  • 液相也有一年了,细细想来还是有好多不清楚的,都是按照师姐以前说的去做,自己也没想过为什么,比如很简单的一个问题,进液相允许的浓度范围为多少,之前师姐告诉一般控制纵坐标MAU在200以下,浓度过高首先对仪器不好,其次如果是未知样品分离的话,会影响判断,不知道还有没有其他问题,

    如果超过200,比如说1000以上,除了对仪器会有损伤以外还会有什么不好吗,或者说也是可以的。

    今天师弟做实验,测咖啡因的含量,浓度都在05mg/ml,以下,如果按浓度来说,不算高,可是MAU都到了1400,2000多,这就很高了,不知道这样对结果是不是会有很大影响,不过他测得东西里面就只有咖啡因,应该不会有很大影响吧?

    感觉对液相还是很生疏啊,这些问题都不知道,
    希望有经验的能不吝赐教!

    看了下大家的讨论,浓度过高对柱子和实验结果都会有影响,具体进样浓度和强度还是说的很模糊,能不能举个具体的例子说明下呢。
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  • kangfengbin

    第1楼2009/03/04

    没什么影响,只是有的工作站有最大电压值限制,这样的话结果会受影响!

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  • dickwang2008

    第2楼2009/03/04

    对于低浓度可能影响会很大,也就是柱子残留比较多

    elfstar 发表:液相也有一年了,细细想来还是有好多不清楚的,都是按照师姐以前说的去做,自己也没想过为什么,比如很简单的一个问题,进液相允许的浓度范围为多少,之前师姐告诉一般控制纵坐标MAU在200以下,浓度过高首先对仪器不好,其次如果是未知样品分离的话,会影响判断,不知道还有没有其他问题,

    如果超过200,比如说1000以上,除了对仪器会有损伤以外还会有什么不好吗,或者说也是可以的。

    今天师弟做实验,测咖啡因的含量,浓度都在05mg/ml,以下,如果按浓度来说,不算高,可是MAU都到了1400,2000多,这就很高了,不知道这样对结果是不是会有很大影响,不过他测得东西里面就只有咖啡因,应该不会有很大影响吧?

    感觉对液相还是很生疏啊,这些问题都不知道,
    希望有经验的能不吝赐教!

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  • elfstar

    第3楼2009/03/04

    对于低浓度可能影响会很大,也就是柱子残留比较多[/quote]

    以前高浓度,我都稀释在进样,看样子以后不用稀释进样了,但不知道如果标准品的浓度为200ug/ml,样品大约为5000ug/ml的时候,稀释和不稀释来讲,那种误差更大。
    因为定量分两种,一种是直接样品和标准品的峰面积计算,这个不知道是稀释还是不稀释误差大?
    还一种是标准曲线法,标准曲线法应该是要稀释在线性范围呢的吧?

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  • 老多_小多

    第4楼2009/03/04

    以前高浓度,我都稀释在进样,看样子以后不用稀释进样了,但不知道如果标准品的浓度为200ug/ml,样品大约为5000ug/ml的时候,稀释和不稀释来讲,那种误差更大。
    因为定量分两种,一种是直接样品和标准品的峰面积计算,这个不知道是稀释还是不稀释误差大?
    还一种是标准曲线法,标准曲线法应该是要稀释在线性范围呢的吧?
    [/quote]
    不是绝对的,灵敏度高的样品会超线性,进样品的浓度是根据它的响应来调整的

    elfstar 发表:对于低浓度可能影响会很大,也就是柱子残留比较多

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  • elfstar

    第5楼2009/03/04

    [/quote]
    不是绝对的,灵敏度高的样品会超线性,进样品的浓度是根据它的响应来调整的[/quote]

    恩,那么响应范围的一般来说为多少呢?有没有一个指标之类的

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  • yiren555

    第6楼2009/03/04

    紫外做咖啡因灵敏度还是很高的。其实自己可以做一个校准曲线的线性范围。方便自己样品需不需要稀释考虑

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  • 〓猪哥哥〓

    第7楼2009/03/04

    这个主要看你的测定样品的吸收情况,
    如果样品在很低的一个浓度吸收都很大的话,可以通过标准曲线来稀释。
    如果要测的成分吸收很低,建议更换检测波长。

    我的一般都控制在了200以内。样品过多会残留,影响柱效冲洗时间也要相应加长。

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  • yuan_log

    第8楼2009/03/05

    我也是,呵呵。高了看着闹心
    不同物质的响应值差别很大,如果定量应作标准曲线选择相适应的线行范围,将检测值落到线性范围内,不可一概而论

    03yx2 发表:这个主要看你的测定样品的吸收情况,
    如果样品在很低的一个浓度吸收都很大的话,可以通过标准曲线来稀释。
    如果要测的成分吸收很低,建议更换检测波长。

    我的一般都控制在了200以内。样品过多会残留,影响柱效冲洗时间也要相应加长。

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  • lsslp

    第9楼2009/03/05

    我也不懂这个道理,学习中!

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  • yuan_log

    第10楼2009/03/05

    对了,还有就是浓度如果足够大,可能导致超载,出的峰就很难看了

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