li_min19831982
第2楼2009/04/03
气固色谱也就是我们平常所说的GC,能直接分离的样品应是可挥发,并且是热稳定性的,沸点一般不超过500摄氏度。包括永久性气体也是只能做GC。有20%左右的已知化合物中,可用GC,其余原则上均可用HPLC,即液固色谱。
液固色谱,即HPLC,适用于分析高沸点不容易挥发,受热不稳定容易分解的,分子量大,不同极性的有机化合物;生物活性物质和多种天然产物;合成的和天然的高分子化合物。涉及石油化工产品,食品,合成药物,生物化工产品及环境污染物等,约占有机化合物的80%。
凝胶色谱:它的实质是筛分效应,进一步分为凝胶渗透和凝胶过滤两大类,常用于生物大分子的制备性分离中,在有机合成和植物化学方面也常有应用。
离子交换色谱:能应用于复杂混合离子的分离,微量物质的富吸以及不纯水或污水的净化。可用于水溶性的能带电荷的植物有效成份的分离,包括氨基酸,肽类,生物碱,有机酸,酚类等有效成份。其中一个重要的应用是制取去离子水。
本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强;反相色谱柱填料极性弱,洗脱顺序由强到弱。以下是详细说明:
1、正相色谱 正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)以及其他具有极性官能团胺基团,如(NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组分的极性大小,即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如正已烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。
2、反向色谱 反向色谱用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出,而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反向填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。