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一种检测辣椒红素含量的方法

海润Kevin

2017/08/07

液相色谱（LC）

1.前言：
辣椒红素是从成熟红辣椒果实中提取的四萜类天然色素，属类胡萝卜素。辣椒红素色泽鲜艳，色价高，着色力强，保色效果好，安全性高，在食品工业应用广泛，可用于水产品、肉类、糕点、色拉、罐头、饮料等各类食品的着色。作为一种天然色素，联合国粮农组织（FAO）和世界卫生组织（WHO）将辣椒红素列为A类色素，在使用中不加以限量。我国食品卫生法规定辣椒红素可应用于多种食品、医药以及化妆品中。目前测定辣椒红素的方法有薄层色谱法、比色法，也有采用HPLC测定的报道，但仅限于检测辣椒中的辣椒红素，未见有香肠中辣椒红素的检测方法，因此，目前急需一种高效、准确的方法来进行香肠中辣椒红素的检测。
2.分析步骤
2.1储备液的配制
准确称量10.00mg辣椒红素，溶解到丙酮中，定容到10mL，作为1000μg/mL的储备液（实际浓度应乘以辣椒红素的纯度），置于-18℃冷藏保存；
2.2标准中间液的配制
准确量取2mL辣椒红素，溶解到正己烷中，定容到10mL，作为200μg/mL的中间液，置于4℃冷藏保存；
2.3标准工作曲线的配制
用标准中间液配制成1、2、5、10、20、50、100μg/mL的标液作为工作曲线用的标准溶液。
2.4样品处理
精确称取2.00样品于50mL离心管中，15mL的丙酮超声提取30min，离心，上清液转移至100ml梨形瓶中。残渣用15ml丙酮重复提取一次，离心，上清液合并到梨形瓶中。37℃旋干（若最后有水残留，加异丙醇旋干）。用2mL正己烷复溶，过膜，上机。
2.5 HPLC测定
2.5.1仪器条件(Agilent 1260 )
2.5.2色谱参数：
色谱柱：Agilent ZORBAX RX—SIL，5μm，4.6mm *250mm
柱温：30℃
流速：0.8mL/min
进样量：20μL
流动相：正己烷：乙醇=90:10（V/V）
3.结果与分析
3.1保留时间：
20mg/L与50mg/L辣椒红素通过RX—SIL色谱柱分离，确定保留时间，如下图:

3.2检出限
在基质中添加相当于样品含有1.0mg/L的标准品，经前处理上机检测，计算其信噪比（S/N）＞10，如图：

3.34.4 线性关系
精密吸取辣椒红素标准品，用正己烷溶稀释成系列浓度为1，2，5，10，20，50，100，200mg/L标准溶液，分别进样测定，以峰面积响应为纵坐标，辣椒红素浓度为横坐标，得到辣椒红素的回归方程为Y=8.05659X-0.09749，相关系数：0.9998，线性关系良好。

4.5 空白样品添加回收：

回收率
名称	添加浓度	回收率%
名称	添加浓度	火腿肠	香肠
辣椒红素	spike-1mg/kg-1	88.71	91.27
	spike-1mg/kg-2	82.63	85.42
	spike-1mg/kg-3	84.25	86.33
	spike-1mg/kg-4	95.62	95.1
	spike-1mg/kg-5	91.59	89.74
	spike-1mg/kg-6	88.48	84.55
RSD%		5.36	4.57
辣椒红素	spike-20mg/kg	93.24	96.68
辣椒红素	spike-100mg/kg	98.44	98.69

添加回收选取市场上香肠及火腿肠做质控实验，回收均在80%-100%之间，方法稳定性良好。

5.0 结语

初步用正相色谱做脂溶性物质，对此类型化合物较理想，后续继续尝试中。

分
该帖子已被版主-夏天的雪加10积分，加2经验;加分理由:原创奖励

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p3256961

第1楼2017/08/07

学习了，辣椒红色素用反相色谱能做出来吗

0

p3256965

第2楼2017/08/07

正相色谱？楼主用的很全面啊，

0

風痕

第3楼2017/08/07

应助达人

有水加异丙醇为啥就可以旋干？请教楼主。

0

有水有渝

第4楼2017/08/08

应助达人

检出限用10倍噪声是不是有点大了，这个达到常规的定量限的浓度了。

0

有水有渝

第5楼2017/08/08

应助达人

异丙醇沸点高达82.45 ℃，即使可以形成共沸物，但也不可能降到37 ℃，也请教为什么可以异丙醇，另外有水也没有关系吧，微量水完全可以与正已烷分层，应该不会影响检测。
風痕(yiwang520) 发表:有水加异丙醇为啥就可以旋干？请教楼主。

0

海润Kevin

第6楼2017/08/08

对用正相色谱做的
p3256965(p3256965) 发表:正相色谱？楼主用的很全面啊，

0

海润Kevin

第7楼2017/08/08

水和异丙醇是互溶的，异丙醇的沸点比水的低，在抽真空状态下，异丙醇更容易旋出并将水带出。
風痕(yiwang520) 发表:有水加异丙醇为啥就可以旋干？请教楼主。

0

海润Kevin

第8楼2017/08/08

异丙醇沸点高达82.45 ℃，旋转蒸发仪是使烧瓶在最适合速度下恒速旋转以增大蒸发面积。通过真空泵使蒸发烧瓶处于负压状态。蒸发烧瓶在旋转同时置于水浴锅中恒温加热，瓶内溶液在负压下在旋转烧瓶内进行加热扩散蒸发，加热温度可接近该溶剂的沸点，同时异丙醇和水时互溶的，异丙醇易挥发时会逐渐将水带离。个人理解及实验得出，不当之处敬请指正版主。
有水有渝(xky0230699) 发表: 异丙醇沸点高达82.45 ℃，即使可以形成共沸物，但也不可能降到37 ℃，也请教为什么可以异丙醇，另外有水也没有关系吧，微量水完全可以与正已烷分层，应该不会影响检测。

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海润Kevin

第9楼2017/08/08

异丙醇沸点高达82.45 ℃，旋转蒸发仪是使烧瓶在最适合速度下恒速旋转以增大蒸发面积。通过真空泵使蒸发烧瓶处于负压状态。蒸发烧瓶在旋转同时置于水浴锅中恒温加热，瓶内溶液在负压下在旋转烧瓶内进行加热扩散蒸发，加热温度可接近该溶剂的沸点，同时异丙醇和水时互溶的，异丙醇易挥发时会逐渐将水带离。个人理解及实验得出，不当之处敬请指正。
風痕(yiwang520) 发表:有水加异丙醇为啥就可以旋干？请教楼主。

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有水有渝

第10楼2017/08/08

应助达人

这个要看你的负压达到多少，如果负压达到-0.09MPa以下，水的沸点可以降到40度以下，按这个原理，用无水乙醇代替异丙醇是不是更好
海润Kevin (p3081717) 发表: 异丙醇沸点高达82.45 ℃，旋转蒸发仪是使烧瓶在最适合速度下恒速旋转以增大蒸发面积。通过真空泵使蒸发烧瓶处于负压状态。蒸发烧瓶在旋转同时置于水浴锅中恒温加热，瓶内溶液在负压下在旋转烧瓶内进行加热扩散蒸发，加热温度可接近该溶剂的沸点，同时异丙醇和水时互溶的，异丙醇易挥发时会逐渐将水带离。个人理解及实验得出，不当之处敬请指正版主。

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