【求助】更换柱子和流动相带来的问题

1 你的柱子应该没什么问题，用甲醇和水交替着冲洗管路和柱子
2 在每次进样之前，用乙腈或者甲醇把进样口多洗几遍，进一针溶剂看有没有残留
3 保留时间变了，没有问题的，只要每次保留时间能稳定就可以了

rurub 发表:现在和别组合用一台HPLC，但问题接连出现。

我的柱子是C18反向柱，分析物是RDX，流动相为WATER，METHANOL，ACN；

别组的柱子是正相柱，分析物是NTO,DNAN, NQ，流动相为ISO-OCTANE, ISO-PROPANOL, ISO-METHANOL+TFA

在别人做过实验后，我用ACN 10ml/min去冲洗流路10分钟，然后做自己的样品，最后我的两根柱子接连出现问题，No.1的RDX保留时间从7分钟向前漂移到4分钟，No.2的保留时间不但向前漂移，而且基线出现上下漂移很严重，影响整个分析。

我的问题是：
1）这两根柱子还有什么方法补救吗？虽然订了新柱子，但急需数据，估计等不到新柱子了

2）请老师提供些建议和方法来清洗流路（在别人用之后），除了清洗方法外还应该注意些什么（毕竟流动相和柱子全换），我现在了解的是清洗方法和洗针溶液的更换，但发现总有些别人的溶液残留在loop和connection里面，这样怎么清除呢？

3) No.2 柱子的保留时间往前漂移了，我还可以用来继续分析吗？

我觉得先用纯甲醇慢慢冲几个小时，然后再看看。

下次别拿乙腈，用甲醇冲，而且你冲的时间太短

先用甲醇冲一会，也有可能进气泡了，建议排一下气泡

实验时压力有没有增大？
用你的两根柱子在其他仪器试试看其他的成分，看看有保留时间没有变化。
重复进样你现在的样品，看看重复性怎么样

梯度洗一遍，多洗一段时间，进样口是否脏了？检测时间延后应该没有太大影响，只要你这次做的时候都是这个时间出现行了

你的柱子应该没有什么问题，用乙腈和甲醇多冲冲就行
正相和反相之间交换最好多冲冲，我们一般都用异丙醇过渡，因为我们用正己烷做正相的流动相
还是你在过渡的时候冲洗不过

从你介绍的情况看，是别组做完正相后清洗不够，然后你做反相前又未充分冲洗。建议二组协调一下，大家都增加做完后的冲洗时间（具体所需时长可试一下，这比下次做分析之前冲洗更重要），然后也相应增加分析前的平衡时间。

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