【有奖讨论】手动进样的几个问题

对于进样体积，一般来说大多进10ul，有些方法也进20ul，进样量过大会使峰变宽甚至变形，主要原因是样品扩散和溶剂效应的影响。对不同的化合物影响不同，分析条件不同也不同。尽量用流动相做样品溶剂，进样量对样品峰形的影响会比用纯甲醇或乙睛要小。

1.进样多大体积最合适？（有实验数据的重奖励）
一般应为柱体积的0.5%
2.进样过大，或是拿1mL针来进样有什么利弊？
进样量过大时，充满进样环后的sample会排掉，不会影响上样量，但是用1ml注射器进样容易损坏进样口。
3.如果进样10uL,怎样能确保它的准确性？
好办，直接更换10ul的进样环
4.进完一个样再进下一个样时洗针多少次？（有洗针污染情况实验数据的重奖励）
一般不低于8次
5.手动进样器最好的使用维护方法。
进样阀的问题

以下问题在使用进样阀过程中有可能发生。
A）手动进样阀，转动不灵
原 因 解决方法
1、转子密封损坏 更换或调整转子密封
2、转子太紧 调整转子的松紧度
B）手动进样阀，载样困难
原 因 解决方法
1、进样阀安装不当 重新安装
2、定量环阻塞 清洗或更换定量环
3、进样器污染 清洗或更换进样器
4、管路阻塞 清洗或更换管路

纯属个人观点，不一定正确。
1.进样多大体积最合适？
根据实验样品的浓度和流动相、色谱柱条件确定，一般进样10或20ul，进样体积应为定量环的3-5倍，保证定量环中的样品浓度均一并没有上次残留。
2.进样过大，或是拿1mL针来进样有什么利弊？
进样过大容易使定量环过载，并且对下次的样品可能造成残留污染。
3.如果进样10uL,怎样能确保它的准确性？
手动进样体积不足时，应保证每次定量的刻度一致，目测的刻度线应处于同一水平，尽量同一操作者，保证手法一致。
4.进完一个样再进下一个样时洗针多少次？（有洗针污染情况实验数据的重奖励）
进样针最少洗5-10次，进样前再用样品润洗3-5次。进样口要洗2-3次。
5.手动进样器最好的使用维护方法。[/quote]
每次实验结束一定要充分的冲洗进样口和定量环，并保持进样针的洁净，最好是不同样品采用不同的进样针。

每次实验结束一定要充分的冲洗进样口和定量环，并保持进样针的洁净，最好是不同样品采用不同的进样针。[/quote]
就如楼上所说的
不过“进样量大会导致定量环过载”不理解

小多版主真是深入板油心啊，近来被这些这些问题搞得很头疼，尤其是残留，希望在本贴里系统学习一下！也希望各位板油多多支援啊~~~

建议小多版主多加一个问题：一般样品该配制多大浓度合适呢？
感觉浓度的大小对峰型也很有影响的，这个和进样量多少对峰型的影响应该是差不多的吧？

应助达人

1：进样大于50ul，小于100ul，多一点没有问题，不会影响其准确性，但多了浪费。最适合的是50ul。也可以说是选择定量环的两倍到两点五倍。
进样量小于定量环，容易引起误差，你的进样针的准确性是一个问题，再就是进样针与进样器之间密合性也有关系，再就是溶液的扩散性是需要考虑的。进样的快慢也要考虑了。
进下一针的时候洗多少次不重要，关键是要洗干净，一般要求三次以上。浓度高的，残留多的要多洗。洗的时候，可以针尖往上慢慢挤出，润湿针尖后，针尖往下快速的排出溶剂，把针尖上的液体带走，洗针头。
维护我说不好，说说，注意的问题，使用时用力不要过大，要围绕轴心旋转。针不要留在进样器上。

一般样品该配制多大浓度合适?
这个问题跟物质的响应有关系，还是不列了

1.进样多大体积最合适？（有实验数据的重奖励）
理论上只要超过20uL就行，一般用100uL的针，进个40～60uL就可以了
2.进样过大，或是拿1mL针来进样有什么利弊？
对于仪器来说没什么害处，无非就是浪费你自己的样品而已
3.如果进样10uL,怎样能确保它的准确性？
有做不完全进样的，但不提倡，好像是说准确度不太好把握，因为这操作者看刻度的人为误差有关，还跟进样时的操作手法有关，不是很准
4.进完一个样再进下一个样时洗针多少次？（有洗针污染情况实验数据的重奖励）
一般洗个三五几次吧，这是我自己的经验，不是很肯定啊
5.手动进样器最好的使用维护方法。
（1）进针不要戳得太厉害，以免损坏密封垫
（2）进针后要对进样器内残留的样品作适当的洗涤
（3）如果用缓冲盐做流动相的，仪器停止不用时务必记得冲洗柱子和管路系统，包括进样阀周围的所有管路，否则进样阀内容易析出无机盐，磨损进样阀密封垫，导致漏液。血的教训啊，我们最近的一台液相就是如此，没办法，只好换了一个新的密封垫，好几大百呢