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【求助】流动相用磷酸盐缓冲液后用水冲柱子,柱效大大降低,怎么办?

液相色谱(LC)

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  • 岛津VP-ODS2色谱柱,流动相为甲醇:KH2PO4缓冲液(5:95),之后,用水冲柱30min,流速为0.4-0.8mL/min,再用甲醇冲了1h。第二天以甲醇:KH2PO4缓冲液(30:70)为流动相,色谱峰面积变很小甚至不出峰。而且无论用不同的流动相还是甲醇,柱压都较以前同条件下有较大降低。
    是不是用水冲时间过长,造成部分柱填料塌陷了?有没有什么补救措施,能使柱效提高?希望各位高手给予帮助!急!!!(柱子刚买还没用多长时间呢,买时花了4000-5000块,如果就这样报废,太可惜了)

老多_小多 2009/06/09

你照我说的用纯甲醇冲洗后试下吧,应该可以的

wsy18 2009/06/09

看看柱子的说明书有什么规定。 一般柱子不能用纯水冲洗,应该用5:95的甲醇:水溶液冲洗,最后过渡到纯甲醇。

judy_1220 2009/06/09

[quote]原文由 [B]zetala[/B] 发表: 说明书上说如果流动相有有机盐的话,先用水以1mL/min速度冲10min,再用甲醇冲;如果流动相如果有离子对溶剂或溶于水的物质的话,用甲醇或乙腈(含0.1%乙酸)冲。 我不清楚我实验的流动相是属于哪种情况,如果是第一种情况,那么,我用水冲时间太长了,如果是第二种情况,那就更糟了。[/quote] ODS2的柱子没那么娇气,不出峰你还是找找其它原因,

〓猪哥哥〓 2009/06/09

[quote]原文由 [B]zetala[/B] 发表: 我现在用甲醇:水(70:30)冲呢,冲了2h,柱压有所上升。 我决定用甲醇:水(70:30)再冲一段时间,然后换纯甲醇冲,从小流速逐渐过渡到大流速,再降到小流速,冲一晚上,明天再看看情况。(谢谢各位了,明天我再分配奖励分吧)[/quote] 冲洗条件并没很大问题啊。首先看看你的柱子可以用纯水吗? 新买的柱子没有那么快就坏了,冲洗时间长点先看看,坏了可以联系厂家商量。 也可以换另一台仪器来冲洗,看看压力,排除仪器问题。

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  • 老多_小多

    第1楼2009/06/09

    水冲时间过长,流速过大,造成部分柱填料塌陷可能性比较大
    你用纯甲醇从低流速一直到高流速冲洗活化一个晚上看会怎么样?

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  • zetala

    第2楼2009/06/09

    那是可以用水冲的,只是我用水冲的时间过长了,是吗?

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  • 老多_小多

    第3楼2009/06/09

    时间过长,流速到了0.8过大

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  • wsy18

    第4楼2009/06/09

    看看柱子的说明书有什么规定。
    一般柱子不能用纯水冲洗,应该用5:95的甲醇:水溶液冲洗,最后过渡到纯甲醇。

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  • zetala

    第5楼2009/06/09

    说明书上说如果流动相有有机盐的话,先用水以1mL/min速度冲10min,再用甲醇冲;如果流动相如果有离子对溶剂或溶于水的物质的话,用甲醇或乙腈(含0.1%乙酸)冲。
    我不清楚我实验的流动相是属于哪种情况,如果是第一种情况,那么,我用水冲时间太长了,如果是第二种情况,那就更糟了。

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  • judy_1220

    第6楼2009/06/09

    “色谱峰面积变很小甚至不出峰”,我觉得你还是找找其它方面的原因,流动相的、流路上的、进样阀的……不太像单纯柱子的问题

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  • judy_1220

    第7楼2009/06/09

    ODS2的柱子没那么娇气,不出峰你还是找找其它原因,

    zetala 发表:说明书上说如果流动相有有机盐的话,先用水以1mL/min速度冲10min,再用甲醇冲;如果流动相如果有离子对溶剂或溶于水的物质的话,用甲醇或乙腈(含0.1%乙酸)冲。
    我不清楚我实验的流动相是属于哪种情况,如果是第一种情况,那么,我用水冲时间太长了,如果是第二种情况,那就更糟了。

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  • zetala

    第8楼2009/06/09

    可是,现在柱压也有较大下降,不管用流动相还是甲醇,应该还是有柱子的原因吧?

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  • 老多_小多

    第9楼2009/06/09

    你照我说的用纯甲醇冲洗后试下吧,应该可以的

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  • zetala

    第10楼2009/06/09

    我现在用甲醇:水(70:30)冲呢,冲了2h,柱压有所上升。
    我决定用甲醇:水(70:30)再冲一段时间,然后换纯甲醇冲,从小流速逐渐过渡到大流速,再降到小流速,冲一晚上,明天再看看情况。(谢谢各位了,明天我再分配奖励分吧)

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