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【原创】按中国药典测定维生素D2时遇到的邪门事,大家提高警惕!

液相色谱(LC)

  • 我按中国药典附录测定维生素D2原料,流动相调为正己烷-正戊醇(1000:1.5),色谱柱采用的是大连伊力特的hypersil硅胶柱,仪器为waters2695_2487.按操作规程对样品进行处置。结果系统适应性很好,分离度均符合要求。然后就按附录要求进行样品处置,进样前用0.45微米的有机滤头过滤后进样。

    结果邪门的事情发生了:内标物在各个样品瓶配制浓度相同,单从采集的色谱图来看,内标物色谱峰信号相差特别大,内标峰面积在各个样品间的相差最大的达10倍,而且重新配样后,内标峰不能重现上次结果。以前测定D2也很多次了,从来没发现有这样的问题,怎么回事呢?
    后来把进样器重新清洗了一下,问题依旧。换了一瓶内标物,也没解决问题。后来怀疑是机器的问题,换到Agilent 1100上,还是一样的问题。换了一根色谱柱,还是没有解决问题。
    到目前为止,我已经用掉了10瓶正己烷了(每针90分钟,流速1.0ml/min),折腾了一星期多了,还是没有解决问题。检品已经快超期了,主任又催得紧,我死马当活马医,又准备做最后一次,并且跟主任说,如果这次我在做不出来,就换别人做吧,我最近肯定招邪了。
    这回做实验,我还是严格按药典附录操作,后来感觉做这么多遍了,过不过滤也无所谓了,因此样品进样前也就没有过滤直接进样了。结果,更邪门的事情发生了:一切正常!检品顺利完成。
    这时,我才怀疑可能是样品进样前过滤引起的问题。我把内标物储备溶液未过滤进样一次,过滤后又进样一次,结果发现过滤后的样品比未过滤的峰面积减小了60%!大家注意了,我用的有机滤头,生产厂家是上海密粒膜分离技术有限公司生产的。但我估计其他厂家的有机滤头可能也有同样的问题。因此建议大家如果做D2,进样前千万别过滤。
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  • 〓猪哥哥〓

    第1楼2009/07/28

    按照药典的标准有的是做不出来,我也碰到过。没办法

    不过滤一定要加个预柱了。

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  • 老多_小多

    第2楼2009/07/28

    过滤吸附的问题一直都存在,你把初滤液不要会怎么样?

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  • qplongsan

    第3楼2009/07/28

    就是弃去初滤液后出问题的,滤头的问题。

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  • flyaway

    第4楼2009/07/29

    应该试试看其他公司的滤头,或者试试看其他种类的滤头。不一定是所有的滤头都有问题的。

    qplongsan 发表:就是弃去初滤液后出问题的,滤头的问题。

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  • flyaway

    第5楼2009/07/29

    比较奇怪的药典方法,为何原料药还要过滤呢?
    有机膜这个叫法太没有实质性了,应该询问厂家,到底是什么材质的滤膜?
    顺便说,这家滤膜厂商的名字从来没有听说过~

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  • wsy18

    第6楼2009/07/29

    看来应该是滤膜的问题,可以按flyaway说的换几种滤膜试试。

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  • huaibeijiayuan

    第7楼2009/07/29

    学习了,下次注意这个问题

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  • Randy

    第8楼2009/08/02

    不过样品很脏怎么办了,到时候测几个样,柱效又下降了很麻烦啊!我用的也是这种滤膜,以后要注意才行!

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  • 第9楼2009/08/02

    加一个保护柱,再加一个预柱,样品不要过滤,经常清洗保护柱即可。

    bank7233 发表:不过样品很脏怎么办了,到时候测几个样,柱效又下降了很麻烦啊!我用的也是这种滤膜,以后要注意才行!

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  • wangjf999

    第10楼2015/02/26

    谢谢提醒,我也出现了这样的问题,看看是不是滤膜的问题

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