【第二届网络原创作品赛】解析食品检验卫生标准理化部分（一）之液相色谱法

GB/T 5009.27-2003 食品中苯并(a)芘的测定

解析：标准中有第一法 荧光光度法，第二法 目测比色法。其实第二法基本上不会用，主要问题是只能概略定量，而苯并(a)芘作为一个强烈致癌的物质，量很低，要求准确定量，这个方法也几乎不用。

存在的问题：标准中有第一法 荧光光度法可以准确定量，但是样品处理相当复杂，提取之后还要净化，一个增加了操作流程，一个增加了检测成本，最重要的是操作不当很容易造成回收率低、结果不准确的问题。

解决方法：NY/T 1666-2008标准规定了用高效液相色谱法测定肉制品中苯并[a]芘，样品处理方法与GB/T 5009.27-2003在原理上大同小异，只要在样品处理上采用GB/T 5009.27-2003的方法，提取后不用净化（因为色谱柱上可以跟杂质分离）直接用乙腈定容后上仪器测定，色谱条件可以采用NY/T 1666-2008法的，流动相乙腈：水=88：12，用荧光检测器，激发波长384nm，发射波长406nm。

GB/T 5009.28-2003 食品中糖精钠的测定；
GB/T 5009.29-2003 食品中山梨酸、苯甲酸的测定

3个项目可以同时测定，放到一起说，而且新标准也是一起检测。
解析：苯甲酸、山梨酸、糖精钠是衡量食品卫生质量的重要指标，GB/T 5009.28-2003、GB/T5009.29-2003中都列出了液相法、薄层色谱法，其中山梨酸、苯甲酸的测定还有气相法。苯甲酸、山梨酸、糖精钠虽是较常见的检测项目，但是要得到一个准确可靠的结果，也存在一定的难度。

存在的问题：薄层色谱法整个检测过程都比液相色谱法复杂，气相法测定苯甲酸、山梨酸的样品处理还要萃取，也是过于烦琐。虽然液相色谱法简单，但是GB/T 5009.28-2003的糖精钠只有汽水、果汁、酒3类样品用HPLC做，其余的冰棒、糕点、蜜饯等都是用另外的方法，酱菜更是选用离子选择电极法，都相对HPLC法要复杂，我们又如何用HPLC来检测这些样品呢？

解决方法：
1.GB/T 5009.28-2003中5.6写到了可以同时测定苯甲酸、山梨酸和糖精钠，确实可以同时测定，色谱条件要根据情况来调整，因为山梨酸和糖精钠色谱条件不好很容易重叠。
2.食品样品往往含有大量的油脂、蛋白质，对提取极为不利；如处理不干净也会污染色谱柱，影响检测工作。这类样品处理的关键在于如何找到一种较理想的沉淀剂，尽量排除待测样品中的油脂、蛋白质，且不影响待测物组分的回收率。GB/T5009.28-2003使用硫酸铜溶液沉淀蛋白，对于蛋白质含量较低的食品尚可，对于乳制品、月饼等高油脂、高蛋白样品则沉淀效果不理想。如用10.6％亚铁氰化钾溶液和21.9％醋酸锌溶液（配置方法GB/T 5009.7-2003）则效果更理想
3.对于酱菜类，有些脂肪含量高，可采用GB/T5009.29-2003中的GC处理方法，只要最后挥干定容改为50%乙醇即可用HPLC测定。

GB/T5009.35-2003 食品中合成着色剂的测定

解析：标准中规定了HPLC法、薄层色谱法、示波极谱法，三个方法的样品处理方法大同小异。可以根据自己的仪器来选择方法。

存在的问题：虽然三个方法大同小异，但是每个方法规定的样品类型不一样，我们用HPLC法测定时又如何来选择合适的样品处理方法，另外还有很多样品，如五颜六色的果冻等，甚至有些黑心老板做的玉米馒头、酱卤菜、冰淇淋等都加色素，标准中没有这类样品的处理方法，我们又这么来处理这样麻烦的样品呢？。而且HPLC法的色谱条件只有一个254nm，虽然8种色素都有吸收，但是杂质吸收也较高，特别是亮蓝的灵敏度很低。

解决方法：
1.果冻最大的难度就是怎么溶解，想到果冻是用什么做的就不难了。一般原料都是卡拉胶、琼脂等，只要加热就会溶解。所以称取样品后加水，放60-70℃水浴中搅拌就会溶解，然后按标准提取即可。
2.其他类样品的处理可以根据样品类适当的改进，因为样品各异，这里就不多说了，最近有很多人参加国家能力验证的比对样品检测色素（有疑问的板油可以回复提问再探讨）。
3.色谱条件可以根据你所需来改进，毕竟不是测定所有的色素，一般的样品加4种色素已经算很多的了。色素除了254nm有吸收外，其实在可见光波段也有吸收，如柠檬黄在430nm也有吸收，但是杂质无吸收。所以可以根据自己的情况来调整。

GB/T5009.82-2003 食品中维生素A和维生素E的测定

解析：
标准中有第一法 高效液相色谱法和第二法 比色法，而比色法只能测定维生素A，且方法更复杂，不可取。而第一法也有很多人不明白为什么这么复杂？我简单介绍下：
1.乙醚、乙醇为什么要处理？
从数据的准确性来说，乙醚和乙醇中含有过氧化物和醛类都会与维生素A、E反应，造成结果偏低。不过用好点的试剂可以省了这步，试剂对结果的影响只是一个小误差。
2.标准为什么要标定？
维生素A、E的固体都不是很稳定，就算你新买来的，纯度也很难到99%以上。时间稍微长点就只有80—90%或更低，所以要标定。
3.为什么要用内标？
萃取的步骤很多次，提取也复杂，而且萃取也易乳化，用内标法更准确。

存在的问题：高效液相色谱法是目前的通用方法，但是对于刚做的人来说是有很多地方摸不着头脑。标准中标准品的皂化和标定问题解释的不清楚，我个人觉得会造成了检测人员只能按部就班。而我论坛也看到有人发帖问出峰的问题（http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20060413/392852/）。

解决方法：
1.首先我们要清楚标准品的问题：目前购买这两个标准品的时候，很多品名就写维生素A和维生素E，如果你不清楚标准品的问题就会出现http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20060413/392852/这个帖子的问题。维生素A它包括了视黄醇和视黄醇乙酸酯，这两个物质的结构是不一样的，所以你用液相测定的时候两个物质的保留时间也不一样，视黄醇乙酸酯经过皂化后就变成了视黄醇；同样的道理，维生素E也包括了生育酚和维生素E乙酸酯，其中生育酚有包含了α－生育酚、γ－E生育酚、δ－E生育酚，乙酸酯经过皂化后就变成了生育酚。乙酸酯类一般都是人工合成的，为了其稳定性，所以做成乙酸酯型。人工添加的维生素E乙酸酯造化后都转化成α－生育酚，γ－E生育酚、δ－E生育酚只有天然维生素E才含有的。http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20060413/392852/这个帖子的问题其实就是楼主没搞明白这点，我估计是标准品不对造成的标准品与样品的保留时间不一致。（如果还不明白可以回复帖子提问再探讨）
2.方法的改进：标准中加100g/L的抗坏血酸5mL，且标注临用前新配，那是因为抗坏血酸（既维生素C）易分解，由于方法中加抗坏血酸的作用主要是抗氧化，所以抗坏血酸多点对实验的结果无影响。可以把抗坏血酸溶液改加少量的抗坏血酸固体，这样更方便且抗坏血酸好保存。
3.以下是几个经常用到的中维生素A和维生素E的测定方法：
GB/T 17817-1999 饲料中维生素A的测定 高效液相色谱法
GB/T 5413.9-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 维生素A、D、E的测定
GB/T 9695.26-2008 肉与肉制品 维生素A含量测定
GB/T 9695.30-2008 肉与肉制品 维生素E含量测定
虽然是列了一小部分，但是有此可见其存在的问题，不过方法都是皂化处理，方法大同小异，原理一样。只要你把方法吃透了，所有的这些标准都可以用一个方法来做。

GB/T 5009.83-2003 食品中胡萝卜素的测定

解析：胡萝卜素具有维生素A的生物活性，所以样品处理上与维生素A有点相似。标准中有HPLC法和纸层析法，前面几个标准都说HPLC法好，化学分析法复杂，在这个标准我反而更喜欢纸层析法。因为胡萝卜素存在α、β、γ三种异构体。而HPLC法标准中更是规定要用α、β-胡萝卜素两个标准。纸层析法最后比色测定反而更适用。

存在问题：
1.HPLC法需要两个标准品，而且标准品相当的不稳定，就是固体也变化很快。
2.HPLC法的标准品配制上显的没有纸层析法上详细，比如纸层析法还写了标准要标定且不能全溶解时要皂化（非常有必要）。
3.HPLC法在测定上也存在一定的问题，如http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20080219/1164907/这个帖子里说到的问题。

解决方法：
1.http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20080219/1164907/这个帖子里也说到了一些情况：比如由于流动相和色谱柱的关系, 你样品中会有a－胡萝卜素,与β－胡萝卜素很难分离，造成峰分叉。如果用纸层析法就不存在这个问题。
2.很多人反映出峰慢，用正相方法做肯定会好的多。

终于上作品了。昨天怎么没有发啊？

小猪猪手电不够诱人

希望液相越来越多的版友、版主、专家参与作品大赛！

现在市面上能够比较容易买到的维生素A/E的标准品还是以酯化物居多
像维生素A醋酸酯、棕榈酸酯，维生素E醋酸酯等
我觉得解决的办法最好还是标准连同样品一起皂化
这样就避免了标准不同造成的影响
反正皂化就是把维生素A/E不同的组分统统转化为同一组分