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【原创】ph与保留时间的关系?

液相色谱(LC)

  • 今天我用不同ph值的流动相,流动相的其它条件都是一致的,看看ph值和保留值的关系,发现了一个奇怪的现象。。。现详述如下



    药品:A、B,其中B是A的代谢产物,A的pka为9.06,B为中等强度的极性物质,为胺类物质,其pka(未查到)肯定大于A的pka。



    流动相:0.04mol/L磷酸二氢钠缓冲液、0.003mol/lSDS(十二烷基磺酸钠——离子对试剂)、三乙胺0.1%、磷酸调ph。



    (ph=3.5)B的保留值=8.754



    (ph=4.5)B的保留值=9.031



    (ph=5.5)B的保留值=8.065 三种ph值条件下,A的保留值变化不大。。



    我的疑问是:(1)B是碱性物质,提高ph应该增强其保留,当ph=5.5,其保留值应该是3者中最高的,为什么反而最低?如果我的理解有误的话,在本实验中,ph变化也并没有呈现出任何的规律性(从小到大或从大到小)?



    (2)问题扩张:ph影响保留时间的作用机理是什么??(回答准确,强烈建议版主加分、加钱)



    (注:考虑到离子对试剂的原因,柱子平衡直至测试物质的保留值稳定(3次测试结果一致)才记下保留时间,色谱柱为Agilent eclipse XDB-C18,反相色谱法、测试的样品为1ug/ml的标准溶液)



    期待大家的讨论!!!!
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  • 宁夏恋冰

    第1楼2009/10/15

    离子交换色谱过程在含水介质中进行,色谱峰的保留值主要是由流动相的PH值和缓冲液类型来控制。
    PH值:对交换基团和样品的溶解度有很大的影响。一般来说增加PH值,样品的正电性降低,在阳离子交换色谱上样品的保留值降低,而在阴离子交换色谱上样品保留值增加。
    分离有机酸和有机碱时,这些酸碱的离解程度可通过改变流动相的PH值来控制,增大PH值会使酸的电离度增加,使碱的电离度减少;降低PH值,其结果相反。
    对于强酸和弱酸性阳离子交换树脂最适宜的PH值分别为2-14和8-14。而强碱性和弱碱性阴离子交换树脂,最适宜的PH值分别为2-10和2-6。

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  • 有水有渝

    第2楼2009/10/15

    应助达人

    楼主可以参考一下
    http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20091012/2153356/
    可能会给你一点灵感。
    不知道是不是高PH对离子对的结合能力有较大影响,因为没人做过对比,不知道离子对在不同PH下结合能力有没有一个突越范围。

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  • 〓猪哥哥〓

    第3楼2009/10/15

    也可以参考:
    http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20091012/2153356/

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  • 哇咔咔

    第4楼2009/10/15

    应该是和离子对有关系.

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  • wqm321

    第5楼2010/09/13

    PH值对样品的保留时间还是有较大的影响的!具体的,没法总结!主要是不同ph下,固定对样品的保留性不同!

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  • 头像更新中,请稍候…

    第6楼2010/09/14

    PH影响样品的保留,好像不是绝对的~
    我有个师姐,遇到过一次,具体细节记不清了~

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  • Daichaozheng

    第7楼2010/09/14

    请参阅附件:

    寒冰(cxm2009) 发表:今天我用不同ph值的流动相,流动相的其它条件都是一致的,看看ph值和保留值的关系,发现了一个奇怪的现象。。。现详述如下

    药品:A、B,其中B是A的代谢产物,A的pka为9.06,B为中等强度的极性物质,为胺类物质,其pka(未查到)肯定大于A的pka。

    流动相:0.04mol/L磷酸二氢钠缓冲液、0.003mol/lSDS(十二烷基磺酸钠——离子对试剂)、三乙胺0.1%、磷酸调ph。



    (ph=3.5)B的保留值=8.754

    (ph=4.5)B的保留值=9.031

    (ph=5.5)B的保留值=8.065 三种ph值条件下,A的保留值变化不大。。

    我的疑问是:(1)B是碱性物质,提高ph应该增强其保留,当ph=5.5,其保留值应该是3者中最高的,为什么反而最低?如果我的理解有误的话,在本实验中,ph变化也并没有呈现出任何的规律性(从小到大或从大到小)?



    (2)问题扩张:ph影响保留时间的作用机理是什么??(回答准确,强烈建议版主加分、加钱)

    (注:考虑到离子对试剂的原因,柱子平衡直至测试物质的保留值稳定(3次测试结果一致)才记下保留时间,色谱柱为Agilent eclipse XDB-C18,反相色谱法、测试的样品为1ug/ml的标准溶液)

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