【求助】高效液相法测红霉素含量遇到问题

我原来做过红霉素的含量测定
没有你说的那种情况啊
也是按中国药典的方法测定
你是不是仪器系统的原因？

对照1：
制法：
取红霉素标准品10mg，置10ml量瓶中，加甲醇5ml溶解后，用磷酸　　盐缓冲液[取磷酸盐缓冲液(pH7.0)20ml，用磷酸溶液调节pH值至3.5]稀释至刻度，　　室温放置几天后，取20μl注入液相色谱仪。

对照2：
制法：红霉素标准品各约0.1g，精密称定，分别加甲醇5ml溶解，用磷酸盐缓冲液(pH7.0)-甲醇（15：1）定量稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，作标准品溶液；精密量取标准品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪。

对照3：
制法：取红霉素标准品10mg，置10ml量瓶中，加甲醇5ml溶解后，用磷酸盐缓冲液[取磷酸盐缓冲液(pH7.0)20ml，用磷酸溶液调节pH值至3.5]稀释至刻度，室温放置2小时候，取20μl注入液相色谱仪。

样品：
制法：取本品约0.1g，精密称定，分别加甲醇5ml溶解，用磷酸盐缓冲液(pH7.0)-甲醇（15：1）定量稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取供试品溶液与标准品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，


开始是选择6min左右的那个峰作为主峰，但是后面发现这个峰变得很小了，就怀疑选没选对。

对照1.pdf
对照2.pdf
对照3.pdf
样品.pdf

agilent1200 DAD

应助达人

怎么感觉像对照品变化了前移了，确定缓冲盐的PH调节没有差错，加柱温了没有？离子对试剂可能不稳定。
这个图可以参考一下：

方法没有问题啊
你做的图谱不对啊
你选用的是什么柱子啊？

kidant(kidant) 发表:对照1：
制法：
取红霉素标准品10mg，置10ml量瓶中，加甲醇5ml溶解后，用磷酸　　盐缓冲液[取磷酸盐缓冲液(pH7.0)20ml，用磷酸溶液调节pH值至3.5]稀释至刻度，　　室温放置几天后，取20μl注入液相色谱仪。

对照2：
制法：红霉素标准品各约0.1g，精密称定，分别加甲醇5ml溶解，用磷酸盐缓冲液(pH7.0)-甲醇（15：1）定量稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，作标准品溶液；精密量取标准品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪。

对照3：
制法：取红霉素标准品10mg，置10ml量瓶中，加甲醇5ml溶解后，用磷酸盐缓冲液[取磷酸盐缓冲液(pH7.0)20ml，用磷酸溶液调节pH值至3.5]稀释至刻度，室温放置2小时候，取20μl注入液相色谱仪。

样品：
制法：取本品约0.1g，精密称定，分别加甲醇5ml溶解，用磷酸盐缓冲液(pH7.0)-甲醇（15：1）定量稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取供试品溶液与标准品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，


开始是选择6min左右的那个峰作为主峰，但是后面发现这个峰变得很小了，就怀疑选没选对。

对照1.pdf
对照2.pdf
对照3.pdf
样品.pdf

做出来的图谱应该就像4楼的那样

谢谢!!!!

楼主做液相用的什么条件呢“求分享