兽残前处理试剂
第2楼2009/12/24
苏丹红前处理试剂盒
—高效液相色谱法
一、范围
本方法规定了动物源性食品中苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ残留量的快速测定方法。
二、方法原理
试样中的残留的苏丹红经快速检测前处理试剂盒提供的试剂提取、浓缩、净化后用液相色
谱进行检测,外标法定量。
三、试剂和材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为重蒸馏水。
1、乙腈:色谱纯。
2、冰乙酸:色谱纯。
3、无水乙酸钠。
4、对-甲苯磺酸。
5、正己烷:色谱纯
6、乙酸盐缓冲液:称取4.950g无水乙酸钠及0.950g对-甲苯磺酸,溶解于950mL水中,
用冰乙酸调节溶液pH到4.5,最后用水定溶到1000mL。
7、标准品: 苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ
8、标准贮备溶液:分别称取标准品苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各10.0mg,用乙腈溶解后转移
至10mL棕色容量瓶中,用乙腈定容,于—20℃条件下保存。使用时,用乙腈稀释上述
标准储备溶液,配制成不同浓度的标准工作液。
9、苏丹红快速检测前处理试剂盒。
四、仪器和设备
4.1高效液相色谱仪:配紫外-可见检测器。
4.2匀浆机。
4.3旋转蒸发仪。
4.4离心机:4000 r/min
4.5聚四氟乙烯离心管:100 mL,具塞。
4.6微孔滤膜:0.45 µm。
五、测定步骤
5.1准确称取已捣碎的样品5.00 g于50 mL离心管中,先加苏丹红快速检测前处理试剂盒
中的提取剂(液体20.0 mL)、8000r/min均质1min,于4000 r/min离心5 min。
新柱激活:对于第一次使用的层析柱,依次加入2ml洗脱剂(色谱纯乙腈+冰乙酸
=98+2(V/V))、5ml洗涤剂(冰乙酸+甲醇=20+80 V/V)、5ml蒸馏水挤干。
净化:取上清液10mL于50mL试管中,加入20mL水混匀,分次加入层析柱中,用吸耳球从上口
挤压加快流速或用固相萃取机从下抽真空,液体流完后加5mL洗涤剂(乙腈+水=20+80
(V/V))洗涤,挤干柱中液体,加1.0mL乙腈洗脱。收集洗脱液,微孔滤膜过滤,滤液供仪
器测定。
5.2绘制标准工作曲线
移取苏丹红混和标准溶液, 50µg/kg、100µg/kg、200µg/kg、500µg/kg、
100µg/kg标准工作溶液,样液用高效液相色谱仪测定,得出标准工作曲线。
5.3测定
5.3.1液相色谱条件
a) 色谱柱: C18柱,150 mm×4.6 mm(i.d.),粒度5µm;
b) 流动相:乙腈+乙酸盐缓冲液 (80+20,体积分数);
c) 流速:1.0 mL/min;
d) 柱温:室温;
e) 检测波长:490nm
f) 进样量:20 µL。
5.3.2色谱测定
根据样液中苏丹红的含量情况,选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液
中的苏丹红响应值均应在仪器的检测线性范围内。
5.3.3空白实验
除不加试样外,按上述测定步骤进行。
5.3.4结果计算
用色谱数据处理机或按式(1)分别计算供试样品中的苏丹红残留量。
2 ci×V
ω= ————— …… (1)
m
ω-样品中苏丹红残留量,μg/kg;
ci -标准曲线上查出试样溶液中苏丹红标准工作溶液的浓度,μg/L;
2-换算常数;
V-最终定容体积数,mL;
m-供试试料样品重量,g。
六、测定低限、回收率
6.1检测限
本方法的检测限苏丹红为10μg/kg。
6.2回收率
本方法回收率苏丹红为:6 5%~105%。
vcningmeng
第8楼2015/07/27
GPC不是每个企业都买的起的,再说买的起,用起来成本也高的,试剂要求很高。
安谱已经开发出了MIP-SDR分子印迹苏丹红专用柱,克服了氧化铝柱子的各种问题和GPC昂贵的缺点。现在很多客户已经不用国标的氧化铝柱子了,
这是客户发的应用帖子:http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20131017/5014889/index_1.shtml
http://www.docin.com/p-941151407.html
希望可以参考