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【求助】用高效液相检测PAHs，为何检测不到任何波？

hruby

2009/11/21

液相色谱（LC）

各位老师，各位前辈：
急切向各位求教：为何我用高效液相荧光检测器来检测多环芳烃，却检测不出任何波。我上机用的样品是PAHs标准混合样。
条件设置如下：
Agilent1100 高效液相色谱系统（HPLC）
色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18硅胶，柱长250mm，内径4.6mm
柱温：35℃
流动相：甲醇、水
流动相流速：0.5mL/min
梯度洗脱条件及荧光检测波长编程如下表1~2：
表1 流动相的梯度洗脱条件
Time(min) Methanol(%) H2O(%)
0.00 70.0 30.0
20.00 80.0 20.0
33.00 84.0 16.0
40.00 90.0 10.0
50.00 100.0 0.0

表2 荧光检测器波长编程
Time Excitation(nm) Emission(nm) PMT-Gain
0.00 221 337 10
13.00 291 365 10
17.30 250 400 10
20.50 289 462 10
23.00 270 390 10
27.00 254 390 10
35.00 266 415 10
41.00 290 430 10
到底是哪里出了问题？后面改用了紫外检测器，能检到波，但分离效果不佳。请教各位我前面的方法到底出了什么问题，还有就是大家有没有好方法提供阿？
如果能有好的方法提供，将万分感谢阿！

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csh0203csh

第1楼2009/11/21

具体的原因不是很清楚了，但你可以看看这个

0

csh0203csh

第2楼2009/11/21

高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相荧光检测器来检测多环芳烃.pdf[/url]

0

csh0203csh

第3楼2009/11/21

水质多环芳烃类的测定.pdf

0

hruby

第4楼2009/11/21

高效液相荧光检测器来检测多环芳烃.pdf中并没有具体荧光检测器波长的具体编程，只有各种物质的发射波长和吸收波长。请问阁下有没有相关的设置程序可以推荐阿?

0

hruby

第5楼2009/11/22

另外，看了你给的资料。我发现我上机用的标准溶液残留有正己烷。所以想请问一下是不是因为正己烷的原因，荧光检测器才检测不到任何波呢？

0

hruby

第6楼2009/11/22

csh0203csh(csh0203csh) 发表:另外，看了你给的资料。我发现我上机用的标准溶液残留有正己烷。所以想请问一下是不是因为正己烷的原因，荧光检测器才检测不到任何波呢？还有，阁下发的《高效液相荧光检测器来检测多环芳烃.pdf》中并没有具体荧光检测器波长的具体编程，只有各种物质的发射波长和吸收波长。请问阁下有没有相关的设置程序可以推荐阿?谢谢阿~~~
高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相荧光检测器来检测多环芳烃.pdf[/url]

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青橙

第7楼2009/11/22

首先建议你不编程，用单一的发射波长和检测波长检测其中的某种成分，看看是不是能检测到。要是能检测到说明是编程问题。
编程时，是不是应该维持某个波长一定时间：
Time Excitation(nm) Emission(nm) PMT-Gain
0.00 221 337 10
13.00 221 337 10
13.01 291 365 10

0

cefuroxime

第8楼2009/12/03

我做过这个实验，不过用的是Waters的仪器，没有遇到你这个问题，核对了一下你的条件，没有问题。
主要是：你的PMT增益可能不对，最好做一下PMT校正，或者把PMT增益改大，然后再测试。

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