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【分享】高效液相色谱常见问题分析与对策

液相色谱(LC)

  • 高效液相色谱常见问题分析与对策
    液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决;而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。
    A、峰拖尾
    原 因
    解决方法
    1、筛板阻塞
    a、反冲色谱柱 b、更换进口筛板 c、更换色谱柱
    2、色谱柱塌陷
    填充色谱柱
    3、干扰峰
    a、使用更长的色谱柱 b、改变流动相或更换色谱柱
    4、流动相PH选择错误
    调整PH值。对于碱性化合物,低PH值更有利于得到对称峰
    5、样品与填料表面的溶化点发生反应
    a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂b、更改色谱柱
    B、峰前延
    原 因
    解决方法
    1、柱温低
    升高柱温
    2、样品溶剂选择不恰当
    使用流动相作为样品溶剂
    3、样品过载
    降低样品含量
    4、色谱柱损坏
    见A1、A2
    C、峰分叉
    原 因
    解决方法
    1、保护柱或分析柱污染
    取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞,拆下来清洗。如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施。如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。
    2、样品溶剂不溶于流动相
    改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。
    D、峰变形
    原 因
    解决方法
    1、样品过载
    减少样品载量
    E、早出的峰变形
    原 因
    解决方法
    1、样品溶剂选择不恰当
    a、减少进样体积 b、运用低极性样品溶剂
    F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
    原 因
    解决方法
    1、柱外效应
    a、调整系统连接(使用更短、内径更小的管路)
    b、使用小体积的流通池
    G、K’增加时,脱尾更严重
    原 因
    解决方法
    1、二级保留效应,反相模式
    a、加入三乙胺(或碱性样品) b、加入乙酸(或酸性样品) c、加入盐或缓冲剂(或离子化样品) d、更换一支柱子
    2、二级保留效应,正相模式
    a、加入三乙胺(或碱性样品) b、加入乙酸(或酸性样品) c、加入水(或多官能团化合物) d、试用另一种方法
    3、二级保留效应,离子对
    加入三乙胺(或碱性样品)
    H、酸性或碱性化合物的峰拖尾
    原 因
    解决方法
    1、缓冲不合适
    a、使用浓度50-100mM的缓冲液 b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液
    I、额外的峰
    原 因
    解决方法
    1、样品中有其他组份
    正常
    2、前一次进样的洗脱峰
    a、增加运行时间或梯度斜率 b、提高流速
    3、空位或鬼峰
    a、检查流动相是否纯净 b、使用流动相作为样品溶剂 c、减少进样体积
    J、保留时间波动
    原 因
    解决方法
    1、温控不当
    调好柱温
    2、流动相组分变化
    防止变化(蒸发、反应等)
    3、色谱柱没有平衡
    在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱
    K、保留时间不断变化
    原 因
    解决方法
    1、流速变化
    重新设定流速
    2、泵中有气泡
    从泵中除去气泡
    3、流动相选择不恰当
    a、更换合适的流动相 b、选择合适的混合流动相
    L、基线漂移
    原 因
    解决方法
    1、柱温波动。(即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。)
    控制好柱子和流动相的温度,在检测器之前使用热交换器图
    2、流动相不均匀。(流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。)
    使用HPLC级的溶剂,高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气,使用中使用氦气。
    3、流通池被污染或有气体
    用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要,可以用1N的硝酸。(不要用盐酸)
    4、检测器出口阻塞。(高压造成流通池窗口破裂,产生噪音基线)
    取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。
    5、流动相配比不当或流速变化
    更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。
    6、柱平衡慢,特别是流动相发生变化时
    用中等强度的溶剂进行冲洗,更改流动相时,在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。
    7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成
    检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂
    8、样品中有强保留的物质(高K’值)以馒头峰样被洗脱出,从而表现出一个逐步升高的基线。
    使用保护柱,如有必要,在进样之间或在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子。
    9、使用循环溶剂,但检测器未调整。
    重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时,使用新的流动相。
    10、检测器没有设定在最大吸收波长处。
    将波长调整至最大吸收波长处
    M、基线噪音(规则的)
    原 因
    解决方法
    1、在流动相、检测器或泵中有空气
    流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。
    2、漏液
    见第三部分。检查管路接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换泵密封。
    3、流动相混合不完全
    用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂
    4、温度影响(柱温过高,检测器未加热)
    减少差异或加上热交换器
    5、在同一条线上有其他电子设备
    断开LC、检测器和记录仪,检查干扰是否来自于外部,加以更正。
    6、泵振动
    在系统中加入脉冲阻尼器
    N、基线噪音(不规则的)
    原 因
    解决方法
    1、漏液
    见第三部分。检查接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换密封。检查流通池是否漏液。
    2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成
    检查流动相的组成。
    3、流动相各溶剂不相溶
    选择互溶的流动相
    4、检测器/记录仪电子元件的问题
    断开检测器和记录仪的电源,检查并更正。
    5、系统内有气泡
    用强极性溶液清洗系统
    6、检测器内有气泡
    清洗检测器,在检测器后面安装背景压力调节器
    7、流通池污染(即使是极少的污染物也会产生噪音。)
    用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池
    8、检测器灯能量不足
    更换灯
    9、色谱柱填料流失或阻塞
    更换色谱柱
    10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常
    维修或更换混合器,在流动相不走梯度时,建议不使用泵的混合装置
    O、宽峰
    原 因
    解决方法
    1、流动相组成变化
    重新制备新的流动相
    2、流动相流速太低
    调节流速
    3、漏液(特别是在柱子和检测器之间)
    见section 3。检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。
    4、检测器设定不正确
    调整设定
    5、柱外效应影响
    a、 柱子过载b、检测器对反应时间或池体积响应过大c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大d、记录仪响应时间太长 5、 a、 小体积进样(例如:10ul而不是100ul)以1:10或1:100的比例稀释样品b、 减少响应时间或使用更小的流通池c、 使用内径为0.007-0.01的短管路d、 减少响应时间
    6、缓冲液浓度太低
    增加浓度
    7、保护柱污染或失效
    更换保护柱
    8、色谱柱污染或失效,塔板数较低
    更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰,则用强溶剂冲洗旧柱子。
    9、柱入口塌陷
    打开柱入口,填补塌陷或更换柱子
    10、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰
    选择其它类型的色谱柱以改善分离效果
    11、柱温过低
    提高柱温。除非特殊情况,温度不宜超过75℃
    12、检测器时间常数太大
    使用较小的时间常数
    P、分离度降低
    原 因
    解决方法
    1、流动相污染或变质(引起保留时间变化)
    重新配置流动相
    2、保护柱或分析柱阻塞图
    去掉保护柱进行分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞,可进行反冲。如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏,建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在,进口可能阻塞了,更换入口处的筛板或更换色谱柱。
    Q、所有的峰面积都太小
    原 因
    解决方法
    1、检测器衰减设定过高
    减少衰减的设定
    2、检测器时间常数设定太大
    设定较小的时间常数
    3、进样量太少
    增大进样量
    4、记录仪连接不当
    使用正确的连接
    R、所有的峰面积都太大
    原 因
    解决方法
    1、检测器衰减设定过低
    采取较大的衰减
    2、进样过多
    减少进样量
    3、记录仪连接不正确
    正确连接记录仪




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  • flyaway

    第1楼2009/11/26

    应该再排版好点,看起来才方便

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  • liudi20052006

    第2楼2009/12/16

    很详细,楼主辛苦了

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  • 冷冷的冰雨

    第3楼2009/12/16

    楼主辛苦啊!支持一下

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  • ggghh

    第5楼2010/05/11

    lz辛苦了,很好,谢谢

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  • dujicheng521

    第6楼2010/05/11

    很不错,辛苦了,谢谢

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