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【求助】请教如何调整流动相达到峰分离?

液相色谱(LC)

  • 请教:
    配好某一浓度的标准品溶液,分别进样10μl、20μl、30μl、40μl、50μl,每一浓度梯度进样三次,得到的数据用来做工作曲线,目前遇到的问题是进样10μl后各个峰之间能较好的分离,但是20μl后便出现峰重叠的问题,吸光度值也挺小的仅为0.04,应该不存在进样量过多的问题吧?.请问有没有什么好的办法能解决这一问题呢,我用的流动相是异丙醇:甲醇=60:40
    色谱图见附件
    谢谢各位!!!

附件:

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  • 有水有渝

    第1楼2010/03/25

    应助达人

    建议增加溶液浓度,减少进样量试试。

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  • xydell

    第2楼2010/03/25

    是用流动相溶解的样品不?

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  • jinhui-yu

    第3楼2010/03/25

    其他有没有呢?比如说改变流动相之类的?
    因为我的标准品量比较少
    谢谢

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  • jinhui-yu

    第4楼2010/03/25

    不是用流动相溶解的所以会有前面的溶剂峰,用的是正己烷溶解的

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  • tianyu9700

    第5楼2010/03/25

    你的标准品是用什么配的?完全跟流动相一样的比例么?

    jinhui-yu(jinhui-yu) 发表:请教:
    配好某一浓度的标准品溶液,分别进样10μl、20μl、30μl、40μl、50μl,每一浓度梯度进样三次,得到的数据用来做工作曲线,目前遇到的问题是进样10μl后各个峰之间能较好的分离,但是20μl后便出现峰重叠的问题,吸光度值也挺小的仅为0.04,应该不存在进样量过多的问题吧?.请问有没有什么好的办法能解决这一问题呢,我用的流动相是异丙醇:甲醇=60:40
    色谱图见附件
    谢谢各位!!!

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  • jinhui-yu

    第6楼2010/03/25

    都是用正己烷配的,参考的文献资料
    因为是脂溶性的

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  • 哇咔咔

    第7楼2010/03/25

    正相柱么?可以考虑流动相里面稍微加点乙腈,看看效果

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  • jinhui-yu

    第8楼2010/03/25

    是C18,加多少呢,加在甲醇里面吗?多少比例呢?乙腈和甲醇的性质不是差不多吗?只是乙腈的洗脱能力强?还是乙腈有其他优点呢?
    谢谢!

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  • 柏坡

    第9楼2010/03/25

    加点乙腈是有好处,峰响应值会有所提高,提高柱温也可以试试。

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  • jinhui-yu

    第10楼2010/03/26

    我的柱温已经40°了,有没有必要再提高呢?
    还有就是具体加多少呢应该有个比例吧,不然以后怎么重复啊?

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