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【求助】用三氯化铝作为显色剂测总黄酮含量

tylerconan

2010/04/06

紫外可见分光光度计（UV）

三氯化铝法测定总黄酮的含量，基本上还是可靠的，但对有些样品本身颜色就比较黄比较深的，我就先用活性碳脱色了，然后再稀释再去与三氯化铝显色，可是却出现了如下情况：加入三氯化铝的样品颜色反而浅，样品本身做对照的倒是颜色深，这样一来就没法代入标准曲线去计算了，因为减去空白后就是负值，请问这是为什么？如何解决？

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第1楼2010/04/07

这可能是活性炭也将黄酮大部分地吸附了。三氯化铝溶液的加入显色不明显（黄酮含量太低），反而是稀释效果更明显，因而溶液颜色变淡（颜色可能不是黄酮了）。建议从紫外区再选黄酮有吸收的波长，进行紫外吸收测定或双波长双光束测定，可以消除背景色的影响。

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tylerconan

第2楼2010/04/07

十分感谢您的建议。我用活性碳脱色，但其实效果并不明显，颜色还是很黄的。
所以我才只好又稀释。
稀释的倍数大（如100倍），颜色就太浅，稀释10倍的话，浓度又超过了标准曲线浓度的范围。

我按照您说的我再试一下。
zlhuang0132(zlhuang0132) 发表:这可能是活性炭也将黄酮大部分地吸附了。三氯化铝溶液的加入显色不明显（黄酮含量太低），反而是稀释效果更明显，因而溶液颜色变淡（颜色可能不是黄酮了）。建议从紫外区再选黄酮有吸收的波长，进行紫外吸收测定或双波长双光束测定，可以消除背景色的影响。

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tylerconan

第3楼2010/04/07

建议从紫外区再选黄酮有吸收的波长，进行紫外吸收测定或双波长双光束测定，可以消除背景色的影响。

我试了，从190-1000nm 全扫了一遍，最高的波形出现在435nm，原来做标准曲线是417nm。现在偏移了这些，有问题吗？
不过倒是加显色剂的样品吸光度比不加的高，这个问题倒是解决了。

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