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【求助】UPLC出现分叉峰

  • benliuwener
    2010/04/14
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 我在用UPLC做代谢物时,刚开始出峰都很正常,峰也挺漂亮的,用的甲醇-水体系,流速0.2mL/min,但是做了一段时间后峰就开始出现分叉了,换了一根新柱子也是做一了几个样就成那样了。原来用的短柱现在买了一根100mm的长柱,刚开始做样峰就是分叉的,不知道是怎么回事?我请教过,说可能是我没平衡好柱子,请问新柱子要怎么平衡才行?我一般都是甲醇 或乙腈低流速冲一晚上,然后用做样的流动相平衡。
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  • zhabc12

    第1楼2010/04/14

    新柱平衡一夜应该能用了,分叉是不是该品种不适用此柱啊?

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  • hellohygo

    第2楼2010/04/14

    是某一个峰分叉么,还是都这样?

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  • benliuwener

    第3楼2010/04/14

    进溶剂时溶剂峰不分叉,样品里基本上峰都分叉

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  • benliuwener

    第4楼2010/04/14

    用的甲醇作溶剂,荧光检测,甲醇在2min的样子有一个背景峰,这个峰不分叉
    我做的PAH代谢里的1-OHP,用的waters的ACQUITY UPLC® BEH C182.1×100 mm1.7 µm柱子,我对柱子不太懂,不知道这个柱子是不是不适合用来分析这种物质?要是柱子进了微粒,是不是会有这种影响?

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  • 〓猪哥哥〓

    第5楼2010/04/14

    柱子不适合该类成分,换一根试试看

    benliuwener(benliuwener) 发表:进溶剂时溶剂峰不分叉,样品里基本上峰都分叉

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  • benliuwener

    第6楼2010/04/14

    我还是有点不明白,那换什么样的柱子比较合适?为什么刚开始峰是好的,做做就不行了?

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  • haloooyanzai

    第7楼2010/04/19

    有没有装预柱?可能是预柱脏了,换个滤芯吧:)

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  • 微雨燕双飞

    第8楼2010/04/19

    问一个很关键的问题:与开始相比,同一分析条件下的系统压力有没有升高?升高多大比例?
    色谱柱堵塞是导致峰分叉的一个重要原因,所以色谱峰分叉往往伴随系统压力升高。
    经常遇到同行抱怨,用5微米的色谱柱很快压力升高;1.7 微米的色谱柱可想而知。
    当然以上属于猜测。具体还得您排查。

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  • flyaway

    第9楼2010/04/20

    的确,系统压力是一个很明显的故障指标

    微雨燕双飞(godblesschina) 发表:问一个很关键的问题:与开始相比,同一分析条件下的系统压力有没有升高?升高多大比例?
    色谱柱堵塞是导致峰分叉的一个重要原因,所以色谱峰分叉往往伴随系统压力升高。
    经常遇到同行抱怨,用5微米的色谱柱很快压力升高;1.7 微米的色谱柱可想而知。
    当然以上属于猜测。具体还得您排查。

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  • 哇咔咔

    第10楼2010/04/20

    建议楼主测一下柱效.就知道是否柱子的原因了.确实比较奇怪,开始检测很好.后期分叉,最大的可能性就是柱子,柱效降低,有污染,或者填料流失造成的.是否是每次实验完毕,清洗柱子和系统不足造成的?
    UPLC,没有用过,只是按HPLC来分析.但应该是有共同之处的,可以借鉴下.

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