【资料】超临界流体色谱同时测定维生素B2，B3和烟酰胺

2．3 线性关系考察
将3种维生素对照品各取适量，精密称定后用甲醇稀释成含核黄素3～30mg／L、烟酸和烟酰胺各5～50mg／L的混合标准溶液。取6个不同浓度的对照品溶液按上述实验条件各进样3次，记录其色谱图；以对照品质量浓度X(mg／L)为横坐标，对应的峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线，并求出回归方程。可见上述3种维生素在适用浓度范围内具有良好的线性关系。
2．4 精密度及稳定性试验
通过测定上述3种维生素的日内和日间的峰面积，考察分析方法的精密度和样品的稳定性。在上述实验条件下，连续进样8次，核黄素、烟酸和烟酰胺峰面积的相对标准偏差(RSD)分别为1.11％ ，0.85％和0.88％；放置1d后测定其峰面积的RSD分别为1.11％，0.60％和0.71％。精密度和稳定性均令人较为满意。
2．5 回收率试验
精密称取已知含量的同一样品3份，分别加入不同量的3种维生素对照品，按“2．6”节样品测定项下的实验步骤进样分析，计算其回收率。结果核黄素、烟酸和烟酰胺的回收率(平均值±SD)分别为：(97.3±1.34)％，(102.3± 1.25)％ 和(98.0±1.36)％。
2．6 样品测定
取昆明振华制药厂生产的复合维生素B(批号990701)5片，碾碎后用5mL甲醇溶解并超声提取20min，用0.45μm滤膜过滤，适当稀释后在上述色谱条件下进样分析。
2．7 讨论
(1)由于烟酸和烟酰胺的化学结构及性质相近，因此当以CO2加甲醇作流动相时，这两种维生素难以完全分开，且维生素B2的保留时间太长；若在流动相中加入0.1％的二乙胺，这3种维生素可以完全分开，且保留时间缩短，能够满足快速分析的要求。通过调节甲醇和二乙胺的体积分数，可使色谱峰形得到改善。
(2)分别以水、甲醇和乙醇作溶剂提取样品，结果以甲醇溶剂提取效果最好。样品用甲醇溶解并超声提取后，直接进样分析，不需要复杂的前处理。
(3)通过测定回收率、精密度并考察线性关系，表明该方法可以用于同时测定这3种维生素，结果令人满意。
参考文献：
[1] Hurtado S A，Nogues M T V，Pulido M I，Font A M．J Chrormatogr A，1997，778：247