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【金秋计划】四种常用色谱柱的活化、清洗、再生和保存

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2024/09/06

其他色谱仪综合讨论

正确合理地使用不同类型的色谱柱，不仅可以提高色谱柱的使用效率，还可以延长色谱柱的使用寿命。
（1）反相色谱柱（C18柱）。
活化：先用100%甲醇或乙腈冲洗20-30个柱体积，再用50%乙腈或甲醇冲洗10个柱体积，最后用流动相平衡10个柱体积。
清洗：使用完毕后，立即使用高比例有机相冲洗20个柱体积，然后使用100%有机相冲洗20个柱体积。
再生：极性样品分析完毕后，依次使用蒸馏水、甲醇四氢呋喃、甲醇、蒸馏水分别冲洗20个柱体积；非极性样品分析完毕后，依次使用异丙醇、四氢呋喃、二氯甲烷、正己烷、异丙醇分别冲洗20个柱体积。
保存：使用甲醇或乙腈。
（2）正相色谱柱（氨基柱、氰基柱）。
活化：正相色谱分离条件时，使用流动相平衡20-30个柱体积；反相色谱分离条件时，先使用100%异丙醇或乙醇冲洗50-100个柱体积，再用流动相平衡20-30个柱体积。
清洗：先使用100%异丙醇冲洗50个柱体积（低流速），再使用100%甲醇冲洗50个柱体积，最后使用异丙醇过渡到正相流动相条件进行清洗。
再生：正相使用后再生依次使用甲醇、异丙醇、氯仿、正己烷、氯仿、异丙醇、甲醇分别冲洗20个柱体积；反相使用后依次使用95%乙腈+5%蒸馏水、四氢呋喃、95%乙腈+5%蒸馏水分别冲洗10-20个柱体积，再用95%乙腈+5%蒸馏水低流速过夜冲洗。
保存：使用异丙醇或正己烷。
（3）亲水作用色谱柱（HILIC，Amide）
活化：先用50%-60%乙腈冲洗50个柱体积，再用流动相平衡20个柱体积，使用梯度洗脱时，进样间隔也需要用流动相平衡10个柱体积。
清洗与再生：使用50%乙腈清洗除去极性污染物，如清洗不充分，可适当加大水相比例进行冲洗，当水相比例过高时，应注意柱压，适当降低流速。
保存：如果超过4天不使用色谱柱，可使用95%乙腈保存色谱柱；如果流动相中含有缓冲盐，可以先使用蒸馏水冲洗10个柱体积，再使用95%乙腈保存。
（4）离子交换色谱柱（SAX，SCX）
活化：先用100%甲醇或乙腈冲洗20-30个柱体积，再用流动相平衡10-20个柱体积。
清洗：先使用蒸馏水冲洗30个柱体积去除缓冲盐，再使用100%甲醇或乙腈冲洗20个柱体积，最后保存在50%甲醇或乙腈中。
再生：先使用高浓度盐的缓冲液进行清洗，再依次使用蒸馏水、100%乙腈进行冲洗，最后保存在50%乙腈中。
保存：使用甲醇，40%有机相。

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