【资料】超临界流体色谱法测定三七及云南白药中人参二醇和人参三醇的含量

三．水解、提取、净化条件
样品加l5％硫酸乙醇-水(1：1)10ml，精密加内标溶液(胆固醇的无水乙醇液lmg／ml，lml，水浴中回流水解4h，再加入l5％ 氢氧化钠溶液l5ml至强碱性，回流0.5h，冷却．用环己烷提取3次，每次l0ml。提取液经过1.5g硅藻土一水柱，除去少量乙醇及水溶性杂质，用环己烷5ml洗涤水柱，然后再经过0.3g硅胶H柱保留人参二醇，人参三醇和内标等，弃去环己皖，用3ml无水乙醇洗脱。
四．标准曲线的绘制
分别精密吸取人参二醇、人参三醇的无水乙醇溶液(均为lmg／m1)0.5，l，2，4ml，准确加内标溶液lml，加入15％硫酸乙醇-水(1：1)l0ml经上述水解、提取、净化后，挥去溶剂乙醇，用4ml二硫化碳溶解，取0.2μl进样SFC分析，分别计算人参二醇和人参三醇与内标的峰面积比，以峰面积比(Y)对相应的人参二醇或人参三醇的量(X)进行回归，回归方程为：
人参二醇：X=1.6l3Y+0.029 r=0.9999
人参三醇：X=1.538Y+0.322 r=0.9992
人参二醇或人参三醇的量(0.5～4.0mg)与峰面积比成线性关系。
五．加样回收率
精密称取三七粉0.1g或云南白药0.5g，加入人参二醇和人参三醇各lmg，同上经水解，提取、净化后，进行SFC分析，计算加样回收率。
六．检测限
以信噪比为3：1计算，人参二醇的最小捡测量是3.97×0.000000000001g，人参三醇的最小检测量是4.17×0.000000000001g。
七．样品分析
精密称取三七粉(80目，昆明大观制药厂)约0.1 g，云南白药(云南白药厂8906—09)约0.5 g，经上述水解，提取，净化后，挥去乙醇，用二硫化碳4ml溶解，取0.2μl进样SFC分析，计算人参二醇和人参三醇与内标的峰面积比，代入回归方程计算含量。结果：三七中含人参二醇及人参三醇分别为1.92±2.10(CV)％及2.71±1.36(CV)％；云南白药中含人参二醇及人参三醇分别为0.212±2.56(CV)％及0.285±2.79(CV)％。
讨 论
三七粉及云南白药中无十扰内标的杂质峰。
人参二醇和人参三醇在酸中加热不稳定，因此绘制标准曲线时也需要经过水解，提取等操作。
本法用强酸强碱水解较完全，测得人参二醇及人参三醇的含量较文献法高。本法取样量少、灵敏、简便、快速，操作全过程可在8h内完成，为三七及云南白药中人参皂甙元的测定提供了较好的方法。对三七资源的研究及制剂的质量控制将有促进意义。
为了减小死体积，缩小溶剂峰，超临界流体色谱多采用分流进样。由于分流比不太稳定，目前很难用计算法定量，必须用内标法。分流比不稳定可能是样品中不挥发成分沉留在分流管壁上所致。有时分流管堵塞，可用热吹风吹通。每次进样前分流管用电吹风吹2min，分流比相对稳定。
因SFC流动相中的流动速度比GC慢，使用FID检测器溶剂峰较大。要使溶剂峰与组分分开，就要延长分析时间。我们将乙醇换成二硫化碳作进样溶剂，因二硫化碳在FID中的响废值小，溶剂峰很小，缩短了分析时间，使之在20min左右完成，可以作为常规分析。使用FID检测器．对中药及中成药中的有机成分有很高的检测灵敏度，不仅可以测定中成药中已知的有效成分，还可以测出来知成分作指纹鉴别，如云南白药的SFC图。因此SFC作中成药的质量控制是较好的手毁，有很大发展潜力。