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【求助】关于黄曲霉毒素测定的几个问题？

睿武孝文

2010/08/05

中药/天然药检测

前言
2010年版药典已在我部门开始逐步施行，其中某些新增项目，由于样品和仪器等原因，并没有立即施行，下面是我对一个新增检查项目的疑问，恳请前辈给予不吝赐教。

2010年版中国药典-附录61页：附录IX V 黄曲霉毒素测定法

本法系用高效液相色谱法（附录VI D）测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素（以黄曲霉毒素B₁、黄曲霉毒素B₂、黄曲霉毒素G₁和黄曲霉毒素G₂总量计），除另有规定外，按下列方法测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（40:18:42）为流动相，流速每分钟0.8ml；采用柱后衍生法检测，衍生溶液为0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀释至1000ml制成），衍生化泵流速每分钟0.3ml，衍生化温度70℃；以荧光检测器检测，激发波长λ_ex=360nm（或365nm），发射波长λ_em=450nm。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。

混合对照品溶液的制备精密量取黄曲霉毒素混合标准品（黄曲霉毒素B₁、黄曲霉毒素B₂、黄曲霉毒素G₁、黄曲霉毒素G₂标示浓度分别为1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。精密量取储备液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。

供试品溶液的制备取供试品粉末约15g（过二号筛），精密称定，加入氯化钠3g，置于均质瓶中，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11 000转/分钟），离心5分钟（离心速度2500转/分钟），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，量取续滤液20.0ml，通过免疫亲合柱（Afla Test^@P），流速每分钟3ml（1秒钟滴下1滴，编者注），用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法分别精密吸取上述混合对照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。另精密吸取上述供试品溶液20~25μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B₁、黄曲霉毒素B₂、黄曲霉毒素G₁、黄曲霉毒素G₂的量，计算，即得。

【附注】（1）本实验应有相应的安全、防护措施，并不得污染环境。

（2）残留有黄曲霉毒素的废液或废渣的玻璃器皿，应置于专用贮存容器（装有10%次氯酸钠溶液）内，浸泡24小时以上，再用清水将玻璃器皿冲洗干净。

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睿武孝文

第1楼2010/08/05

问题1：这个衍生的原理是什么？

问题2：为什么要采用衍生法？我看到也有用直接液相荧光检测器检测的，为什么不用？

问题3：免疫亲合柱一定要购买这个型号吗？好像只有这个厂家生产，还是美国的；会不会形成行业垄断？

问题4：在供试品溶液的制备中，将离心更换为滤过可以吗？在用微孔滤膜滤过后，量取续滤液20.0ml，这个20.0表示什么？用什么量取？

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haiyuzp

第2楼2010/08/16

这么麻烦，看到就纠结

0

梧桐

第3楼2010/08/17

没有具体做过，不过，也是有许多疑问。量取20.0应该是表示一个精度范围吧。不过，对于20ML移液管来说，恐怕是用不成吧？应该用哪种量器？

0

crystal416

第4楼2010/08/18

没做过，等前辈来解答～

0

小鸟飞翔

第5楼2010/08/30

好像前一段时间欧盟在进口的花生制品中也检出了黄曲霉素

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seasonsun

第6楼2010/09/07

至于不柱子后直接接荧光检测器，我认为应该是因为此法是柱后衍生法，要在柱后添加衍生剂。

0

梦药师

第7楼2015/09/05

问题1：这个衍生的原理是什么？此题高深，基层工作者我也不是很清楚。
问题2：为什么要采用衍生法？我看到也有用直接液相荧光检测器检测的，为什么不用？增补版或2015版已经搞定您说的荧光检测器。
问题3：免疫亲合柱一定要购买这个型号吗？好像只有这个厂家生产，还是美国的；会不会形成行业垄断？新版药典已经去掉了型号。可以选择多家供应商。
问题4：在供试品溶液的制备中，将离心更换为滤过可以吗？在用微孔滤膜滤过后，量取续滤液20.0ml，这个20.0表示什么？用什么量取？答：擅自更改方法是不允许的，除非验证。20.0ml用移液管（大肚吸管），小数点后面的0为准确值，大度吸管可以读到0.00位。最后一位为估读。

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