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【原创】网络大赛三等奖!给2010版药典挑个错-双氯芬酸钠肠溶片

分析化学

  • 按照2010版药典验证双氯芬酸钠肠溶片有关物质检测。
    辗转询问当初起草这个品种标准的单位,告知使用的是艾杰尔的MP C18色谱柱,于是联系艾杰尔,送来一支Venusil MP C18色谱柱,5um,4.6*250mm;按照10版药典开始做了,结果意想不到的问题出现了…………

    药典方法:
    供试品溶液:取本品细粉适量(约相当于双氯芬酸钠50mg),精密称定,置50ml量瓶中,加甲醇适量,超声5分钟,放冷,用甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,续滤液作为供试品溶液。
    对照品溶液:另取邻苯二甲酸二乙酯2.5mg,置100ml量瓶中, 精密加供试品溶液1ml,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀。
    系统适用性试验溶液: 取羟苯乙酯、羟苯丙酯与双氯芬酸钠对照品适量,加甲醇溶解并稀释制成每1ml中含2.8μg、4.0μg与2.0 μg的混合溶液。
    色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Venusil MPC18 4.6x250mm, 5μm)
    流动相:甲醇-0.12%冰醋酸溶液(20:80)
    检测波长:240nm
    流速:1.0ml/min
    进样量: 20μl
    测试:供试品溶液,系统适用性试验溶液各进样两针。对照品溶液连续进样5针,峰面积相对标准偏差不应大于2.0%。记录色谱图至主峰保留时间的2倍。用对照品溶液调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰高约为记录仪满量程的20%。双氯芬酸钠峰的保留时间约为20分钟,羟苯乙酯峰与羟苯丙酯峰的分离度应大于5.0。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰,除去邻苯二甲酸二乙酯峰和之前的色谱峰,单个杂质峰面积不得大于对照溶液中双氯芬酸钠峰面积(1.0%),各杂质峰面积的和不得大于对照溶液双氯芬酸钠峰面积的1.5倍(1.5%)。

    一切准备OK,进样了,
    进样20μL供试品,主峰时间在54分钟(图1),当时就晕倒了!!这是什么意思?


    图1 主峰保留时间 54分钟

    连续进了3次样,重现性很好;联系艾杰尔的工程师。分析可能的原因
    1、流速不稳(经测试,没有问题,)排除
    2、流动相配制有误,我们重新配制了流动相,分别用在线混合和预混合,主峰都在54分钟左右,排除。
    大家彻底晕了……药典是法规,我们也不敢有太多的怀疑。

    艾杰尔工程师建议换用低比表面积和低含碳量的色谱柱,他们说:
    MP C18 的比表面积是380㎡/g;含碳量是18%,他们推荐了他们低表面的色谱柱:
    Venusil ASB C18,200㎡/g,含碳12%和Vensuil XBP C18 L,比表面200㎡/g,含碳15%。
    按照药典条件,进样20μL供试品,结果会怎样呢?看图2和3:


    图2 使用 Veusil ASB C18的色谱图,主峰保留时间:14分钟


    图2 使用 Veusil XBP C18 L的色谱图,主峰保留时间:15分钟

    使用低比表面积和低含碳量的柱子,主峰保留时间在14和15分钟,似乎可以接受,但是杂质分离情况很差,还是不适用。再次和艾杰尔工程师商量,大家这回彻底没辙了,陷入了困境。

    没有办法,我们再次求助标准起草单位,结果很简单,药典标示的流动相写反了,原文的流动相
    流动相:甲醇-0.12%冰醋酸溶液(20:80)应为甲醇-0.12%冰醋酸溶液(80:20),额的神啦,彻底服了。赶紧改回来,其他条件不变,吧流动相改过来,使用最早的MP C18,一切OK!见图4和图5

    图4 流动相更正以后色谱图甲醇-0.12%冰醋酸溶液(80:20


    图5 有关物质测定放大图,很OK!

    通过这件事情,我总结
    1、我很开心发现了药典的一个BUG,哈哈哈,如果各位兄弟姐妹又做这个品种,不用走这个弯路了。
    2、第一次切身感受不同比表面和含碳量的柱子,对保留和影响如此之大!以前光看书和帖子上这么说,这回事见识了,降低比表面积和含碳量,保留时间和大幅降低!!
    3、艾杰尔的工程师服务态度很好,也专业,赞一个!
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  • hellohygo

    第2楼2010/08/31

    药典也会出错啊!艾杰尔的专业技术值得称赞

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  • neon

    第3楼2010/08/31

    非常有实用价值,顶!

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  • 博纳艾杰尔

    第4楼2010/08/31

    楼主认真记录实验过程的态度值得我们学习,非常感谢把经历和大家分享

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  • 〓疯子哥〓

    第5楼2010/09/01

    这个文章写的不错,从分析条件到检测过程再到条件的对比,最好总结,一目了然,很棒

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  • 121008

    第6楼2010/09/01

    看来事情没有什么绝对,搞科研一定要有怀疑精神

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  • wangmeibao

    第7楼2010/09/01

    比表面和含碳量是个什么概念呢?
    药典上的流动相比例是可改的,只是这个改的太大。

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  • bitwwwit

    第8楼2010/09/02

    硅胶液相色谱柱的填料是多孔硅胶球,孔的孔径越小,则孔的数量越多,那么硅胶球的整体比表面积就越大。
    就像活性炭那样,它有很强的吸附性能,就和它的比表面大有关。

    硅胶键合C18是通过硅胶表面的硅羟基和C18硅烷反应的,比表面积越大,那么硅羟基就会相对而言得多,那么键合上去的C18数量也多,因而C含量也大。

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  • 2006334215

    第9楼2010/09/02

    楼主太厉害了,对实验的研究有自己的独到一面,顶,今天又学到知识了。

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  • annazhang

    第10楼2010/09/02

    原来药典也有错误,这回学到了,一切得持着怀疑的态度才行啊。

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