【求助】液相 色谱柱问题？？

这是我收集的一些关于再生的，你可以参考下：

色谱柱在使用一段时间后柱效会下降，这时可以考虑对色谱柱进行再生。进行色谱柱再生时，应使用一个廉价的泵，我们建议最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。

再生处理包括活化(右→左) 和净化(左→右) 两种。
请根据下表选择您的再生方法：

极性固定相（如Si，NH2*，DIOL基色谱填料）的再生：
正庚烷←→氯仿←→乙酸乙酯←→丙酮←→乙醇←→水**

非极性固定相（如反相色谱填料RP－18，RP－8，CN等）的再生：
水←→乙腈←→氯仿（或异丙醇）←→乙腈←→水

再生之前先确认一下使色谱柱失效的主要原因是什么，有针对性的再生。
如果是强保留物质则用甲醇、四氢呋喃、氯仿、异丙醇、正己烷、异丙醇、氯仿、四氢呋喃、甲醇的顺序各冲洗45min。
如果是蛋白质累积造成的，则用乙腈：水：三氟乙酸＝50：50：0.1％冲洗色谱柱60min；

对于典型的硅胶基质键合反相柱，在未使用缓冲溶液的条件下，推荐使用以下清洗溶剂系列：
100％甲醇---100％乙晴---75％乙晴/25％异丙醇---100％异丙醇---100％二氯甲烷---100％正己烷
用每种溶剂冲洗至少10个柱体积，对于250mm×4.6mm的分析柱，合适的冲洗流速是1～2ml/min。最后用10柱体积的异丙醇过渡，然后回到原来的流动相体系（但不含缓冲盐），最后回复到起始流动相配置。四氢呋喃也是另外一种常用的清洗溶剂。如果怀疑柱子被严重污染，还可用二甲亚砜（DMSO）或 二甲基甲酰铵和水按50：50的比例混合，以低于0.5ml/min的流速冲洗色谱柱。


两种再生法:1.甲醇:水=90:10-甲醇-二氯甲烷-甲醇-甲醇:水=90:10依次冲洗.
2.水—乙腈—氯仿（或异丙醇）—乙腈—水依次冲洗.这两个方法选一种也可以。

是不是由于你的样品保留比较强造成的呢？你先考虑一下这个问题，再考虑再生，也不迟。

再生有风险，操作须谨慎~

应助达人

进样较多的时候？是不是超过柱容量了，时少量时峰形好吗，会分叉吗？

超过柱容量的可能性很大