【求助】乙酸乙酯萃取物应该选用何方法进行下一步分离

体积排阻,肯定不合适,分子量太小

HPLC的话,可以先试一试反相

应助达人

你的物质在什么溶剂中易溶，什么溶剂中不溶，有没有结构或主要官能团的信息，物质是紫外吸收波长，你是要分离制备，还是进行分析。

应助达人

酸性下为什么稳定，是成盐吗？不知道有没有哪种SPE柱能分离，没说是什么，上网查查相关的信息。

反相曾经用过，情况是这样的：
aglient1200，ODS柱，流动相用的乙腈梯度洗脱，267nm，215nm两个波长下检测，分部收集，做生物活性验证，结果是在很后面（差不多60%以后）才有一点活性，并且在这段时间里边，基线不断上升，峰都很小。于是担心是乙腈洗脱能力不够，换用四氢呋喃，结果在此波长下，基线更高，虽然活性比乙腈洗脱时好了很多，可是分部收集显示两个相邻的部分都有强活性（但是在相邻部分之间的过渡时间里，没有峰，很平整），这一点又很奇怪！按说四氢呋喃洗脱能力已经很强了啊，不应该再出现这种拖很久的现象。请问，这样的情况该如何处理？是不是因为我的物质极性很低（乙酸乙酯提取的），反相不好用了，然后选择正相？谢谢！

谢谢你的回复！
我这物质其实是一个放线菌的次级代谢物，具有生物活性，我就是想把它分离纯化出来，目前已获得相关信息是：
分子量在100-500之间，这是透析的结果；
乙酸乙酯比正丁醇提取的好（但不知是不是在旋干正丁醇是把活性物质给旋跑了？）；
80度以上就基本没生物活性了（这也不知是跑了还是对热不稳定而分解了？）；
酸到pH3都还稳定，碱性不稳定（我不知道该怎样分析这个结果？）；
发酵产物紫外扫描，800-190nm，结果在270nm以下很多峰，随着稀释，峰逐渐减少（不知该如何分析？）；
现在就知道这些了，望不吝赐教！

应助达人

215nm下梯度洗脱，基线肯定漂移比较明显的，你那不是制备色谱，是怎么收集的？先要确定所要物质的保留时间，才行，然后再选择色谱条件，使之与其它杂质完全分离，热不稳定，可以使用常温或低温减压旋蒸。

可以跑个硅胶柱，流动相自己找一下，还有你的是乙酸乙酯萃取的，极性不会太大v，硅胶合适，

如果有DAD看看就知道了

对，我用的分析型，所以收集到做活性的量需要很多次进样才行。对于物质保留时间，我并不知道，因为这是一个未知的化合物。不过我是按照峰来收集的，因为使用的是梯度洗脱，所以峰出来是相对集中的，为了保证收集准确性，都是检测到峰就开始收集，峰结束至少一分钟才换收集瓶的。不知这样对不对？或者你有什么高见？谢谢指导啊！