【第三届原创参赛】代谢产物分离与纯化的心得体会(大鼠篇)

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代谢产物的分离与纯化心得体会(大鼠篇)

代谢的概念
什么叫代谢，在这就不解释啦，大家应该都知道，我们主要做两个方面：大鼠与人。这个原创里面，讨论的是大鼠代谢产物的分离与纯化。

大鼠的介绍
大鼠我们用过的有两种（SPF级）SD大鼠和wistar大鼠，这两只大鼠的区别：
SD大鼠: 生长快，繁育性能好，大多用于安全性试验及营养与生长发育有关的研究。 该品系对性激素敏感，对呼吸道疾病有较强的抵抗力。广泛用于药理、毒理、药效及GLP实验。
Wistar大鼠 ：其被毛呈白色，特征为头部较宽、耳朵较长、尾的长度小于身长。Wistar大鼠性情温顺，性周期稳定，早熟多产，平均每窝产自10只左右，生长发育快，乳腺癌发病率很低，对传染病抵抗力强。
个人觉得SD大鼠挺暴躁，很容易咬人的，Wistar大鼠比较好哦，乖乖鼠。

大鼠喂养
这个问题很关键，饲料控制不好，大鼠会超重地：一天喂2次，水应该给足，要不然会发生惨案的，垫料要3天换一次，要不然，会被熏坏的，消毒必须的，要不然出血热就会光顾你们实验室的，记得去年就在我们这发生啦，封楼2周呢，当时，我们爽坏啦，有时间玩嘛。

给药前准备
第一:大鼠禁食12小时，期间给以0.4%的盐水，为什么禁食呢，让其胃里的饲料代谢完，要不然对以后的分离工作有影响。
第二：给药剂量药换算好，要不然没有根据，发文章会有问题的。

大鼠给药
这个比较讲究，我们常用的方法是灌胃和腹腔给药，腹腔给药简单，扎一针就好啦，灌胃挺有讲究的，本人不才，学了半天才会，牺牲在我手中的大鼠有5只多，那叫一个惨啊。警告大家，在不会灌胃的情况下，千万别自以为是，要不然。。。

尿液富集
有些时候怕样品不稳定，发生变化（代谢产物在尿液中不稳定，个人经验），有三招来防止：
第一招:在收集瓶中加无水乙醇，个人觉得效果很好。
第二招：在收集瓶里加酸，PH＝4为好。
第三招；冰水浴，个人觉得那个麻烦，但也有点效果。

尿液储存
放在冰箱里，冷藏，不易降解滴。

尿液处理
不同的样品处理不一样，我们这做过黄酮，生物碱之类的化合物，据我了解，这个生物碱不好做，黄酮挺好做的，我个人觉得有两种方法:大孔和萃取。大孔树脂，我们这用得D1O1比较多，本人首次用AB-8，觉得不错的，我热衷于大孔。萃取:必须加酸调节PH3，要不然萃不出来的。

样品的分离与纯化
呵呵，代谢产物分离。个人经验：进行大孔柱色谱以后，可以考虑进行凝胶柱色谱，内源性物质一般可以除去，非常好的方法，我记得凝胶下来我就分到一个纯的，哈哈，真爽啊。
由于代谢物极性过大，最好不用硅胶来分，要不然，死吸附严重，样品就这样浪费啦，呵呵，用ODS分离，最好。
最后补充，做代谢的，最好有液质联用，盲分容易浪费时间，浪费经费。下图为凝胶分的纯品