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【第三届原创参赛】环烯醚萜类化合物分离纯化心得体会

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2010/10/05

维权声明：本文为环烯醚萜原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

环烯醚萜类化合物分离纯化心得体会

基本介绍
环烯醚萜（iridoids）为臭蚁二醛（iridodial）的缩醛衍生物。臭蚁二醛是由伊蚊（Iridomyrmex detectus）的防收性分泌物中分得的物质。自1958年的Halpem和Schmid确定的环烯醚萜的基本骨架以来，各国学者对该类化合物作了大量深入的研究。环烯醚萜类化合物具有多种生物活性，近来受到极大关注，发展也很迅速。
环烯醚萜类主要分为：环烯醚萜类、裂环环烯醚萜类、3,4-位无取代的环烯醚萜类、聚合环烯醚萜类等等。本人做的是普通类的环烯醚萜类化合物，且以其苷居多，做的比较浅，下面斗胆一谈，各位看官莫要见笑。

提取部分
环烯醚萜苷类化合物在醇（甲醇、乙醇）中溶解度较好，部分苷类在水中溶解度也很好。本人在对某植物进行提取的时候，实际上并非针对这类化合物，采用的是60%的乙醇/水，是为了兼顾各类成分。后来在实验过程中发现，60%的乙醇/水条件下，这类化合物的提取率是很高的。
注释：其实如果要针对性分离，可以将提取液简单处理后进行D101大孔柱色谱，对环烯醚萜类化合物进行富集。

萃取部分
提取之后，将药液进行浓缩，至无醇味混悬于水中，然后进行萃取。萃取的过程为：等体积的环己烷、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取三次，合并各层提取液浓缩得各层浸膏。就目前实验进展情况来看，环烯醚萜苷类化合物主要集中在正丁醇层，水层也有一部分（我目前还没开始这部分工作）。
注释1：萃取的过程，涉及到溶剂的回收，由于这类化合物在高温下不太稳定，所以用旋转蒸发仪进行减压回收溶剂的时候，温度不能过高，我采用的温度是60度（其实60度已经很高了，但是没办法，不设60度，正丁醇回收不了）。

硅胶柱色谱
正丁醇层进行硅胶柱色谱分离，采用氯仿/甲醇梯度洗脱，样品500g，拌样硅胶1500g，柱床硅胶500g，洗脱梯度为50：1→20：1→10：1→5：1→2：1→1：1→0：1。实验的过程中发现，环烯醚萜类化合物，主要集中在氯仿：甲醇＝10：1和5：1部分。
注释1：选择硅胶柱色谱，也是人之常情，此处也可选择D101大孔柱色谱，对这类化合物进行富集；
注释2：选择氯仿/甲醇系统，是因为经过小试，此系统对样品分离较好，最重要的，样品在此系统中成点性很好；
注释3：拌样1500g，柱床500g，你没有看错，我没有写错。书上说，拌样：柱床在1：1-1：10甚至1：20或者1：50，而我这里却是3：1。我可以很负责任地告诉你，没有必要按书上的说法，柱床500g足够了，分离效果一点也不差。以前做另外一个植物，拌样用了3000g，柱床才600g，分离效果也不差，一点问题都没有；
注释4：梯度的选择，建议6-8个。梯度太少，各流分成分可能过于复杂；梯度太多，后续分离麻烦。这种大型硅胶柱色谱，属于平常所说的“粗分”，不宜太多，不宜太少，不然就是给自己找麻烦。

ODS柱色谱
包括开放型ODS柱色谱和中低压型ODS柱色谱，其实原理一样，只是规模大小不同而已。
我将5：1洗脱的样品进行中低压ODS柱色谱，采用甲醇/水梯度洗脱，水→10%甲醇/水→20%甲醇/水→30%甲醇/水→50%甲醇/水→甲醇，实验结果表明，ODS柱色谱对此类化合物具有良好的分离效果。
注释1：环烯醚萜苷类化合物一般极性较大，一般集中在10%甲醇/水、20%甲醇/水、30%甲醇/水部分；
注释2：水洗下来的，一般为糖苷类化合物，我从此流分中分离得到几个糖类化合物（题外话）；
注释3：ODS柱色谱可以多次进行，反复纯化，利用ODS柱色谱可以得到部分单体化合物；

（注：此图为未合并相同流分前的点板情况）

制备液相（反相）
从ODS柱色谱上洗脱的样品，经过分析，可以考虑进行制备液相，半制备液相等等。
事实上，一般而言，PHPLC也是获得环烯醚萜类单体化合物最重要的手段之一。
流动相可采用甲醇/水，若峰形不好，可加入少量乙酸改善（这一招屡试不爽）。
波长的选择，可以使用230nm、240nm都可以（我们有PAD检测器，验证过）。其它一些化合物，由于连上芥子酰基，对羟基香豆酰基，还可以选择320nm的吸收。
色谱柱一般是C18的居多（目前未使用过其它柱子），品牌好像都还行（我们主要使用YMC）。

凝胶其它填料
由于分离原理的缘故，使用凝胶对环烯醚萜这一类化合物（分子量相差不大，且结构极为类似）进行分离，前景似乎并不明朗。但是，用凝胶将这一类化合物与其他类型的化合物分离，效果还是很不错的。其它如大孔树脂，前面提过，用来富集是个不错的选择；聚酰胺，我没有使用过，不过从其分离原理来看，对这类化合物不会很敏感。

显色剂的选择
部分环烯醚萜类在254nm紫外下有暗斑，这个很实用；
最常用的是浓硫酸-香草醛显色剂：母核上有羟基取代的显蓝色；母核上无羟基取代显紫红色（非绝对）；
其它显色剂如硫酸乙醇、碘等等都可以，我个人偏爱浓-香显色剂。

结构测定与解析（简）
环烯醚萜类化合物进行NMR测试，首先氘代甲醇，这个没有任何疑问。
我在一些文献中，也看到一些特例，比如使用重水、氘代DMSO，这些基本可以忽略。
关于结构解析部分，此处不再赘述。

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第1楼2010/10/09

看来是没有人懂这个啊，呵呵~
把环烯醚萜改成植物就好了~
这样，可能就懂了~

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yijianfeixian

第2楼2010/10/09

主要还是你一开始的一大堆专业名词把人都搞晕了，其实说的就是某化合物的萃取，分离，鉴定呗，还是比较有参考意义的

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分
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第3楼2010/10/09

是的，你说的有道理~
其实把那个名词换成植物是一样的~
只是如果改成植物，就可以再添加一些内容了~
yijianfeixian(yijianfeixian) 发表:主要还是你一开始的一大堆专业名词把人都搞晕了，其实说的就是某化合物的萃取，分离，鉴定呗，还是比较有参考意义的

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learner1999

第4楼2010/10/10

应助达人

"样品500g，拌样硅胶1500g，柱床硅胶500g"
在层析柱上下面一小段纯硅胶，上面是三倍高度的拌样？
这样能分纯么？

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第5楼2010/10/10

一个样品，一根柱子下来，能纯几个是正常的
不能纯也是正常的，呵呵

这根硅胶柱的作用，是粗分
太长费事费时费力费钱
这样已经足够，能达到效果的

另外，有个注释，你可以看看，比例更大
learner1999(learner1999) 发表:"样品500g，拌样硅胶1500g，柱床硅胶500g"
在层析柱上下面一小段纯硅胶，上面是三倍高度的拌样？
这样能分纯么？

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learner1999

第6楼2010/10/10

应助达人

通过点半子监测流份么？
环烯醚萜(kaikaifeng) 发表:一个样品，一根柱子下来，能纯几个是正常的
不能纯也是正常的，呵呵

这根硅胶柱的作用，是粗分
太长费事费时费力费钱
这样已经足够，能达到效果的

另外，有个注释，你可以看看，比例更大

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第7楼2010/10/10

点半子，汗，点板子~
可以通过点板子，一般也是这么做~
这种粗分，我一般不爱点，能砍段就行了~
洗得差不多了就可以换下一个梯度了~

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liuliuhui

第8楼2010/10/11

大柱子砍断，小柱子细分
是这个思路吧！
环烯醚萜(kaikaifeng) 发表:点半子，汗，点板子~
可以通过点板子，一般也是这么做~
这种粗分，我一般不爱点，能砍段就行了~
洗得差不多了就可以换下一个梯度了~

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第9楼2010/10/11

是这样的，提取分离就这样~
那么多化合物，不可能一次性全拿纯的~
慢慢来，呵呵，一步一个脚印~
liuliuhui(liuliuhui) 发表:大柱子砍断，小柱子细分
是这个思路吧！

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ruby70303

第10楼2010/10/12

板上的点都是环烯醚萜类成分吗？

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