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【第三届原创参赛】解决液相色谱峰拖尾小实例

liuliuhui

2010/10/30

维权声明：本文为liuliuhui原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

概述：

灯盏细辛，习称灯盏花，为菊科植物短葶飞蓬[Erigeron breviscapus(Vant.)Hand-Mazz]的干燥全草，主要分布
在云南、广西等地。行温、味辛、微苦，具有散寒解表、祛风除湿、温络止痛之功效。小儿脓耳，捣汁滴入耳内；左
瘫右痪，风湿疼痛，水煎点水酒服。临床上主要用于缺血性心脑血管病的治疗，对冠心病、高粘滞血症也有一定疗效。临床所使用的制剂有口服和静脉滴注两类，收载于《中华人民共和国药典》（1977年版一部）。近年来对其化学
成分、药理学研究及临床应用都进行了深入研究。
由于本人需检测灯盏花素中灯盏乙素的含量，因此对样品进行了初步的液相分析。

结构：

灯盏花素（breviscapine）是从灯盏细辛中提取的黄酮类有效成分，主要含有灯盏乙素和少量的灯盏甲素。结构
如下：

由以上结构可以看出，灯盏乙素和甲素中都含有一个葡萄糖醛酸的结构基团。下面主要是灯盏乙素的液相色谱图
普通液相色谱条件如下:
色谱柱：YMC C18（250×4.6mm，5μm）检测波长：335nm
柱温： 30℃ 流速：0.8mL/min
流动相：甲醇/水=45% 进样量：15μL

如图可见，色谱峰存在严重拖尾现象，这就是由于灯盏乙素中含有一个羧基，硅胶对酸性化合物的吸附，在洗脱过程
中使酸性物质不能同时到达检测器，造成峰展宽。在普通的液相条件下峰型很难看，因此将色谱条件改为:
色谱柱：YMC C18（250×4.6mm，5μm）检测波长：335nm
柱温：30℃ 流速：0.8mL/min
流动相：甲醇/水=45% (AcOH:5‰) 进样量：10μL

加入乙酸后，峰型明显得到改善。（注：加入磷酸的效果也很好，但出于对柱子的维护方面考虑加入乙酸）

讨论：

1．色谱峰拖尾原因：

A：硅胶对酸性化合物的吸附引起的拖尾；

B：进样量太大造成超载现象容易引起拖尾；

C：样品溶剂较流动相的极性大容易造成拖尾现象。

2．解决方案：

A：硅胶对酸性化合物的吸附引起的拖尾

硅胶对酸性化合物的吸附，在洗脱过程中使酸性物质不能同时到达检测器，造成峰展宽。灯盏乙素，为酸性化合

物，普通液相条件下严重拖尾，加入酸后，首先与硅胶表面的酸性硅醇基反应，抑制了灯盏乙素与硅醇基的反应，达

到调节峰型的目的。

B：进样量太大造成超载现象引起的拖尾

当进样量过大时导致拖尾可减少进样量。

C：样品溶剂的极性较流动相的极性大

如果是此原因引起的拖尾现象可将样品用流动相溶解。

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阿三

第1楼2010/10/30

很实用哦赞一个

0

阿宝

第2楼2010/10/30

一般分离酸性物质流动相中都要添加一定浓度的醋酸或者其他酸以改善峰型

0

阿三

第3楼2010/10/30

嗯抑制了酸性物质的解离
阿宝(lpr20) 发表:一般分离酸性物质流动相中都要添加一定浓度的醋酸或者其他酸以改善峰型

0

liuliuhui

第4楼2010/10/30

感谢楼上两位关注本帖，请多提宝贵意见！

0

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幽灵龙猫

第5楼2010/10/30

确实效果相当明显
第一张色谱图很难看啊嘿嘿
改善之后变得非常漂亮，感谢liuliuhui的经验值得借鉴
大家以后做类似成分的时候就知道该怎么做了
提个建议：里面的单位毫升，应该是mL，L为大写，修改一下

0

liuliuhui

第6楼2010/10/30

谢谢版主的建议，我已经修改过了！

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〓猪哥哥〓

第7楼2010/11/01

这篇应该发到液相色谱。O(∩_∩)O~

0

头像更新中，请稍候…

第8楼2010/11/01

猪哥哥版主想抢生意？哈哈哈~
其实很多版块可以发，交叉挺严重的~
〓猪哥哥〓(03yx2) 发表:这篇应该发到液相色谱。O(∩_∩)O~

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yupingfengxu

第9楼2010/11/01

“加入磷酸的效果也很好，但出于对柱子的维护方面考虑加入乙酸”，在试验中，我常常需要使用磷酸配制流动相，磷酸和乙酸对柱子的维护方面的差异可以具体说明吗？

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onlyonejerry

第10楼2010/11/01

同问啊，我们也常使用膦酸的！
yupingfengxu(yupingfengxu) 发表:“加入磷酸的效果也很好，但出于对柱子的维护方面考虑加入乙酸”，在试验中，我常常需要使用磷酸配制流动相，磷酸和乙酸对柱子的维护方面的差异可以具体说明吗？

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