【分享】无菌检查验证方法

               

4.3验证方法
4.3.1培养基微生物生长性能试验：
将培养基配制成溶液，灌装于200个西林瓶（安瓿瓶）中，在其中100个西林瓶（安瓿瓶）中接种枯草杆菌，另100个西林瓶（安瓿瓶）中接种白色念珠菌，接种量均≤100CFU（注：CFU为菌落形成单位，即ColonyFormingUnit），接种后压塞、轧盖，分别在30～35℃和20～25℃温度下培养7天。7天内至少应在50%以上接种的西林瓶（安瓿瓶）中出现培养基有明显的接种微生物生长，以作阳性对照。
4.3.2在模拟灌过程中，随机取出具有代表性的100个装有培养基的西林瓶（安瓿瓶）与100个用于灌装已灭菌的培养基西林瓶（安瓿瓶）送化验室一同培养，作为阴性对照。操作方法应遵守无菌检验标准操作规程。
4.3.3培养基无菌性试验
将用于模拟灌装的培养基配制成溶液，灌装于3000瓶西林瓶（安瓿瓶）中，压塞、轧盖后在20～25℃和30～35℃下各培养7天，应无任何微生物生长。若发现有污染，应明确记录编号、数量，同时检查铝盖、胶塞的密封情况，若有破损应记录并检查破损原因。对于微生物污染的样品应进行鉴别试验，鉴别内容应包括菌落、细菌形态学及革兰氏染色特征等。
4.3.4模拟灌装操作前的准备和要点
4.3.4.1先将配液容器、管道清洗、灭菌，将模拟灌装的培养基配制成溶液。配液过程应遵守相应的标准操作规程。
4.3.4.2试验用的西林瓶（安瓿瓶）、胶塞、铝盖的清洗、灭菌、灌装设备的清洗、消毒及与产品接触的灌装设备部件的清洗、灭菌、安装过程，均应遵守相应的标准操作规程。
4.3.4.3制订模拟灌装过程的取样计划（灌装过程中每20分钟抽样一次，每次取4个样），对供试验用的西林瓶（安瓿瓶）、胶塞进行无菌检查，以证明无菌。
4.3.4.4对参加模拟灌装操作试验的人员进行GMP要求的无菌更衣、无菌操作等技术培训。
4.3.4.5适宜地确定参加模拟灌装试验的人员数量和适当地调试灌装速度。在进入无菌室的操作人员数量上要与生产时的人数相同或略高于正常生产中的人数。灌装机灌装速度的调节应与正常生产时的灌装速度相同或略低于正常生产时的灌装速度。
4.3.5无菌环境的控制与监测在模拟灌装时应与正常灌装时一样，且对无菌区各种微生物的监测应较正常生产时有所增加，或增加取样频次，或增加取样点。具体监测内容有：
4.3.5.1对操作人员无菌服、手套、眼镜等的微生物数量进行监测。
4.3.5.2对无菌区内墙壁、门、设备及操作人员可能接触到的各种表面进行无菌程度检验。
4.3.5.3对空气中的微生物数量进行监测。
4.3.5.4尘埃粒子数的监测。
4.3.6模拟灌装试验应遵守相应的标准操作规程，将定量的无菌培养基溶液灌装到西林瓶中，在冻干机内压塞后轧盖（安瓿瓶封口）。灌装量应与产品常规装量相似，灌装过程中产品及产品容器的暴露时间应与正常产品灌装过程相似，灌装生产出来的每一支西林瓶（安瓿瓶）应按顺序编号，以便于调查其污染原因。
4.3.7试验结果中微生物污染水平（%）可用下列公式计算：
污染水平（阳性生产率）%=微生物污染瓶数实际培养瓶数-破损瓶数×100%

               

4.4培养
将灌封好的瓶和阳性对照置于30～35℃的培养箱中培养7天。
4.5合格标准
阳性对照有细菌生长。
取3001支灌装培养基的注射剂瓶培养，其中染菌的注射剂瓶不得多于3支，即染菌率应≤0.1%为合格。
4.6验证数据的整理、比较和结论
三批培养基配液、灌装是在各个全系统如公用工程系统、环境保持系统、灭菌系统、清洗过程等验证基础上进行的，这些验证另案进行。
无菌配液、灌装所用的包装容器（瓶、塞）的无菌验证须通过灌装过程中随机抽样检查。抽样方法是在开始灌装后每20分钟抽样一次，每次4瓶，至灌装结束。所抽样品瓶放入已灭菌的带盖容器内，送化验室作无菌检查。验证试验的结果见附表。
三批无菌灌装试验的相关记录应按照正常生产记录填写，并归档的本验证报告中。
4.7再验证
4.7.1本试验应每年进行一次。
4.7.2如果主要操作工人改变，应进行再验证。
5验证结论