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【求助】示差检测器--色谱图出现倒峰?

液相色谱(LC)

  • 流动相:50%甲醇
    样品:甲醇溶解
    色谱柱:XB-C18(品牌:列序)
    柱温:35摄氏度
    流速:0.8ml-min 进样量:10ul
    检测器:RI-UV 仪器型号:Ultimate3000(DIONEX 戴安) 示差检测器型号(RI-101 SHODEX )
    色谱图如下:

    在第一张图中---也即RI图谱,第一个倒峰应该是溶剂峰,那么第二个倒峰怎么解释呢?是不是我的样品还不纯呢?
    对应的峰在紫外图谱中几乎没有吸收,而且相应峰的时间也没用对上。如果说是时间延迟,那么第一个倒峰和第二个倒峰、以及第三个色谱峰的时间应该一一对应----都会相应延迟。
    但是,在RI图谱中,第一个倒峰的时间是4.2min,第二个倒峰的时间是7.58min,第三个峰的时间是11.7min;而在紫外图谱中,第一个倒峰的时间是3.9min,第二个倒峰的时间是8.0min,第三个峰的时间是11.65min------第二个倒峰的出峰时间没有相应对上,这个第二个倒峰我无法解释。
    另外说明一下:这个样品是我制备接下来的一个峰-----也即上图对应的11.7min出的峰,制备前我用ELSD-DAD分析过(菲罗门的色谱柱,50%甲醇),这个11.7min处的峰很正态;紫外上能看到这个峰的前面10.7min处有一个极其微弱的峰,ELSD几乎没有响应。但是呢做制备的时候(用的是菲罗门的制备柱),这个11.7min处的峰放大后前沿有一点鼓(询问之后应该是柱子的问题)。
    还有,开始的时候,我是将11.7min处的峰整个都接下来;后来为了避免接峰不纯,我将这个峰前面接一半,后面接一半。 但是发现,将整个峰接下来的样品将只接后面一半的样品进样分析后,二者色谱图完全一样(也即上面的图谱)。 且样品以TLC检测-----都只有一个点(两种通用型显色剂)
    重申我的问题怎么解释第二个倒峰? 我的样品是否已经纯了?
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  • tyrone

    第1楼2010/11/19

    你这是第一次做还是多次重复一直这样呢?
    跑一针空白试试。

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  • 小不董

    第2楼2010/11/19

    应助达人

    RI检测器在DAD检测器后面?所以出峰时间比紫外的峰晚一点。
    紫外没吸收,但RI有信号,说明出来的物质在紫外没吸收,但RI能检测到,这也很正常。至于你说的接的样品前后段的峰一样,是否可以考虑再细分下,再进样实验。

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  • junzai

    第3楼2010/11/19

    回复2楼:
    我进了两针的,都是一样的,至于进空白,当时没有想到 谢谢提醒了!

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  • junzai

    第4楼2010/11/19

    先进示差检测器,在进紫外的 你说的也对,但是第二个倒峰就是不明白 当时也有点急于知道,今天又进了一针ELSD+DAD,样品室纯了,但是还是不明白为什么出第二个倒峰,想知道! 多谢指点!

    小不董(doxw0323) 发表:RI检测器在DAD检测器后面?所以出峰时间比紫外的峰晚一点。
    紫外没吸收,但RI有信号,说明出来的物质在紫外没吸收,但RI能检测到,这也很正常。至于你说的接的样品前后段的峰一样,是否可以考虑再细分下,再进样实验。

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  • junzai

    第5楼2010/11/20

    说错了 应该是先进紫外检测 再进示差检测器的

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  • 青林

    第6楼2010/11/20

    楼主进空白就知道是什么了,一般有水会导致倒峰

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  • junzai

    第7楼2010/11/20

    好的,谢谢 进空白最能说明问题
    还有,我可以补充一下,但不知道我说的对不对,希望与大家探讨一下。
    我用ELSD+DAD分析了一针,在示差的第二个倒峰处,ELSD上有一个极其小的峰,相对应我的样品来说几乎是忽略不计,我觉得可能是的确那个地方有点杂质,但是呢量很少很少,液相是因为这个杂质在示差上的折光率很敏感,因此出现一个比较大的倒峰,容易对人产生假象。

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  • 神话

    第8楼2010/11/21

    空白进的怎么样了?

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  • 幽灵龙猫

    第9楼2010/11/22

    基本纯了,打谱一点问题没有

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  • tigertooth

    第10楼2010/11/22

    倒峰在RI中是很常见的,RI的检测原理是折射率的变化,如果样品折射率大于流动相就是正峰,反之为倒峰。
    而4分钟左右的峰应该为死时间,也就是柱子上没保留,直接出来了。7分钟的应为一个杂质,只不过紫外没吸收。

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