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【第三届原创大赛】TLC比较中药药对金银花单煎与金银花、连翘共煎后化学成分的变化

中药/天然药检测

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    摘要] 目的:通过TLC初步比较金银花单煎与金银花与连翘共煎后化学成分是否有变化。方法:分别制备金银花单煎液与金银花、连翘共煎液不同极性萃取液,采用硅胶薄层层析进行定性比较研究。结果:金银花单煎与金银花、连翘共煎在乙酸乙酯:乙酸(6:1)展开体系中,分别出现5个、4个斑点,两者具有一个共同斑点(Rf=0.87),金银花单煎液中的四个成分均没有出现在药对共煎液中。金银花单煎液中具有最大Rf值(0.88)的斑点,而药对共煎液具有最小Rf值(0.38)的斑点。结论: 金银花单煎与金银花、连翘共煎液TLC斑点差别大。



    [ Abstract ] Objective: To compare the chemical compositions between

    honey suckle decoction and honey suckle & weeping forsythia decoction by TLC. Method: Prepared the honey suckle decoction , honey suckle & weeping forsythia decoction , and two decoctions different polar organic solvents extractions, identified all of them by TLC.

    Results: The results showed there were 5 dots of honey suckle decoction,4 dots of honey suckle & weeping forsythia decoction respectively, when EtOAc:HAc(6:1) as mobile phase. Just one common dot (Rf=0.87) existed in two decoctions, Conclusion: There exists a big difference between two decoction.



    [关键词] 金银花;连翘;薄层层析;化学成分



    中药药对是临床极为常用的两药合用。它不仅具有一定的理论依据和有一定的组合法度,而且具有较高的应用价值。在单味中药的现代药理研究取得较大进展的前提下,进一步开展中药复方的现代研究工作,对于理解中药复方治病原理,加速中医药现代化具有极其重要的现实意义。由于单味中药的有效成分本来就比较复杂,因而影响中药复方药理作用的可变因素或因子更加复杂。能否采用引入药对原理,把由多味中药组成的复方解析成数个药对,进行逐对逐层分析研究。

    中药药对在煎煮过程中,会产生一些化学变化,我们拟对药对煎煮前后化学成分变化进行初步研究。TLC操作简便,可以采用不同展开系统,选用通用或专用显色剂显色,获得很多信息。通过TLC定性检测药对煎煮前后化学成分,为今后药对的进一步研究提供初始依据。

    本实验选用中药中常用的药对:金银花与连翘。金银花为常用中药,忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb. 红腺忍冬L. hypoglauca Mig. 山金银花L. confusa DC. 或毛花柱忍冬L. dasystyla Rehd. 的干燥花蕾或带初开的花。连翘木犀科植物连翘Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl 的干燥果实。两者具有清热解毒,凉散风热之功效。该药对多用于外感风热及温病,热毒血痢,各种痈痘、肿毒等症。

    1. 材料,仪器,试剂

    1.1材料

    金银花、连翘购自芝林大药房。经鉴定金金银花为忍冬科植物忍冬

    Lonicera japonica Thunb. 干燥花蕾或带初开的花。连翘为木犀科植物连翘

    Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl 的干燥果实。

    1.2 仪器与试剂

    层析缸

    石油醚,乙酸乙酯、正丁醇、乙酸、乙醇等试剂均为分析纯

    自制薄层板用硅胶G及硅胶GF254板: 吸附剂与0.5%CMC—Na溶液按比1g:3ml铺板,规格:7.5 cm×2.5 cm及 15cm×5cm,105℃活化1 h,真空干燥器中备用。

    2. 方法与结果

    2.1 金银花试液的制备

    2.1.1 称取干燥金银花药材10g,加水300ml,煎煮30min,过滤;滤渣中加水150ml,煎煮15min,过滤;合并滤液,得灰白色母液约200ml,命名为1号,备用;

    2.1.2 取5号滤液150ml,用石油醚萃取三次,共60ml,得浅黄绿色萃取液,浓缩至20 ml,命名为2号,备用;

    2.1.3 6号滤液用乙酸乙酯萃取三次,共60ml,得淡褐色萃取液,浓缩至20 ml,命名为3号,备用;

    2.1.4 7号滤液用正丁醇萃取三次,共60ml,得淡黄色萃取液,浓缩至20 ml,命名为4号,备用。



    2.2 混合药材试液的制备

    2.2.1 称取干燥金银花,连翘药材各10g,加水300ml,煎煮30min,过滤;滤渣中加水150ml,煎煮15min,过滤;合并滤液,得浅褐色母液约200ml,命名为5号,备用;

    2.2.2 取1号滤液150ml,用石油醚萃取三次,共60ml,得浅黄绿色萃取液,浓缩至20 ml,命名为6号,备用;

    2.2.3 2号滤液用乙酸乙酯萃取三次,共60ml,得淡黄色萃取液,浓缩至20 ml,命名为7号,备用;

    2.2.4 3号滤液用正丁醇萃取三次,共60ml,得浅黄色萃取液,浓缩至20 ml,命名为8号,备用。



    2.4 TLC实验结果

    2.4.1 展开条件

    展开剂 A乙酸乙酯:乙酸(4:1)

    B乙酸乙酯:乙酸(6:1)

    显色剂 碘


    TLC结果分别见表1、表2





    3.讨论

    由于水煎液所含物质较多,直接展开将影响斑点的观察,故选择石油醚、乙酸乙酯、正丁醇为萃取剂,按极性由小到大依次萃取不同极性成分,以利于展开后斑点观察,同时也便于体现金银花单煎液与金银花、连翘共煎液的差异集中于何种极性部位。

    在实验中展开剂的选择和优化是本实验的重点,为此我们参考文献尝试了许多不同的展开剂,有石油醚与甲醇不同比例的展开剂,氯仿与丙酮、乙酸不同比例的展开剂,乙酸乙酯与乙酸、环己烷不同比例、乙酸乙酯与甲醇、乙酸的不同比例的展开剂,以上这些展开剂的TLC结果中斑点分离度不佳,拖尾现象严重。选用乙酸乙酯:乙酸(4:1)和(6:1)的展开剂,能比较好的克服以上不足。这可能与乙酸乙酯极性适中有关。从化学成分上看,金银花其有效成分主为绿原酸,同时还含有挥发油,黄酮类。连翘主要含苯乙醇苷类、木脂体及其苷类、五环三萜类、酚酸类、挥发油类。金银花与连翘中均含有酚酸类物质,且不含碱性类物质或含量极少,乙酸的引入又可以有效克服拖尾现象。

    实验中首先用极性相对较大的展开剂A(乙酸乙酯:乙酸 4:1)展开,从表1中可知,金银花单煎液与金银花、连翘共煎液分别出现3个、4个斑点,两者共同具有一个最大Rf值斑点(Rf=0.96),金银花单煎液中的其余两个成分均没有出现在药对共煎液中,药对共煎液具有两个最小Rf值(0.64、0.71)的斑点。随后用极性现对较小的展开剂B(乙酸乙酯:乙酸 6:1)展开,从表2中可知,金银花单煎液与金银花、连翘共煎液在乙酸乙酯:乙酸(6:1)展开体系中,分别出现5个、4个斑点,两者具有一个共同斑点(Rf=0.87),金银花单煎液中的四个成分均没有出现在药对共煎液中。金银花单煎液中具有最大Rf值(0.88)的斑点,而药对共煎液具有最小Rf值(0.38)的斑点。两者结果表明,展开剂B更能反应金银花单煎、金银花与连翘共煎的TLC差异性。

    导致金银花单煎、金银花与连翘共煎化学成分的差异的主要原因金银花单煎时有成分没有煎出。金银花于连翘共煎时,成分会产生一些化学反应,如沉淀反应。共煎液中的成分是连翘具有的,金银花本身没有,这就需要参考连翘单煎的结果。

    金银花有几种不同的来源,本实验限于时间等条件,无法一一研究。同时TLC的显色剂也值得进一步研究,如选择其他通用和专属显示剂。本实验只是对药对的煎煮的TLC研究做了初步探讨。



    参考文献:


    1. 张英华,陈新,张国飞等.芪冬颐心El服液中绿原酸的含量测定[J].长春中医学院学报,1998,14(3):52

    2. 黄喜茹,刘伟娜,曹冬.金金银花的化学成分 药理作用研究评析.中医药学刊.2005年3期

    3. 宣小龙,史远刚.中药连翘酯苷成分的提取和薄层层析检测.安徽农业科学2006年6期

    4. 贾宪生 吴洪飞.薄层扫描法测定金银花中黄褐毛忍冬皂苷甲的含量. 药物分析杂志-20056
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  • 冷冷的冰雨

    第1楼2010/11/30

    不错,写的很好

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  • 冷冷的冰雨

    第2楼2010/11/30

    再加上图片更好

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  • zhou1988

    第3楼2010/11/30

    这么加可以吧?

    冷冷的冰雨(xy4585618) 发表:再加上图片更好

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  • 阿喜

    第4楼2010/11/30

    哈哈,可以,不错的文章,

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  • 冷冷的冰雨

    第5楼2010/11/30

    可以编辑你的帖子,把图片贴到想要的位置

    zhou1988(zhou1988) 发表:这么加可以吧?

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  • baixi2010

    第6楼2010/12/01

    小弟刚刚接触天然产物领域,在这里弱弱的问一下,楼主在做薄层的时候为什么不加上标准品呢

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  • 〓猪哥哥〓

    第7楼2010/12/02

    把薄层图片点击上面的图片按钮,上传图片就可以了

    zhou1988(zhou1988) 发表:这么加可以吧?

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  • 〓猪哥哥〓

    第8楼2010/12/02

    楼主关心的是成分的多少吧,对是什么还没考察

    baixi2010(baixi2010) 发表:小弟刚刚接触天然产物领域,在这里弱弱的问一下,楼主在做薄层的时候为什么不加上标准品呢

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  • 〓猪哥哥〓

    第9楼2010/12/02

    楼主其实还可以再做细致一点。采用LC辅助,考察具体是什么成分增加或减少,或者新成分产生。同时对Lc图谱采用统计干扰峰检测,对一个峰中含有的成分也进行考察就更全面了。

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  • wangshirf

    第10楼2010/12/03

    两个不同的煎煮方法
    金银花肯定有变化!!!想都不用想

    你光用TLC

    考察只是初步的!!!!!!!

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