【分享】建立高效液相色谱仪（Agilent 1260 VWD）使用及保养规程

1. 开机　　

1.1 打开计算机，输入用户名和密码，进入Windows XP画面。　　

1.2 打开1260 $$lc 各模块电源(不分先后)。待各模块自检完成后，双击“仪器1联机”图标，化学工作站自动与1260 $$lc通讯，进入工作站。（注意：在“仪器1脱机”关闭的情况下，“仪器1联机”方能打开。）　　

1.3 从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面，来调用所需的界面，正常情况会默认进入此界面。　　

1.4 确保对应溶剂瓶装入所要使用的流动相，左击“四元泵”模块下的“溶剂瓶”图标或右击“四元泵”下选择“瓶填充”，输入溶剂的实际体积和瓶总体积，可输入停泵的体积。单击“确定”。 （注意：此操作很重要，以免气泡进入系统）。　　

1.5 轻轻旋开泵上的冲洗阀（缓缓旋开约1/4即可，不可用力太过）。右击“四元泵”图标，出现参数设定菜单，单击“方法”选项，进入泵编辑画面。设流量，从0 ml/min 逐渐变为3ml/min，溶剂A设到100%；单击“确定”。右击“四元泵”图标，选择“控制”选项，选中“打开”，单击“确定”，则系统开始排气，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止；切换到通道同法继续排气，直到所有要用通道无气泡为止（只需排所用到的通道即可）。　　

1.6 右击“四元泵”图标，出现参数设定菜单，单击“方法”选项，进入泵编辑画面。设流量为：0ml/min，单击“确定”， 轻轻关闭排气阀（旋紧即可）。　　

2. 数据采集方法、系列编辑：　　

2.1. 编辑完整方法：　　

2.1.1. 从“方法”菜单中选择“编辑完整方法” 项，选中除“数据分析 ”外的三项，单击“确定”，进入下一界面“方法注释”。　　

2.1.2. 方法信息：　　

在“方法注释”中写入方法的相关信息。此项可忽略不写，单击“确定”，进入下一界面“选择进样源/位置”。　　

2.1.3. 自动进样器参数设定:　　

选择“Als”的进样方式，单击“确定”，进入下一界面“设置方法”。　　

2.1.4. 方法参数设定：　　

在“设置方法”界面选择“四元泵”选项，在“流量”处输入所需流量，如：1ml/min，在溶剂“B”、“C”、“D”处输入流动相所占比例(A=100-B-C-D)，也可在右侧“时间表”项下选择“添加”，编辑梯度。在“停止时间”项下输入样品运行时间，在“压力限值”输入柱子的最大耐高压，如400bar，以保护柱子。　　

选择“进样器”选项输入进样体积。　　

选择“TCC” 选项，在左侧输入所需温度或选“不控制“，选中“和左侧相同”---使柱温箱的温度左右一致。　　

选择“VWD” 选项输入检测波长，一般选择最大吸收处的波长；该仪器只能设一个波长。　　

以上各项编辑完后，单击“确定”，进入下一界面“运行时选项表”。　　

进入“运行时选项表”选中“数据采集”和“标准数据分析”，单击“确定”。　　

2.1.5. 保存方法：　　

方法编辑完，在“方法” 菜单中选则“方法另存为”为新建方法命名，单击“确定”。　　

2.2. 数据采集方法：　　

2.2.1. 序列参数编辑：　　

在“序列”菜单中选择“序列参数”，在弹出对话框中输入操作者名称，数据存储目录路径中的子目录，子目录即为数据图谱存储的文件夹，请认真填写，输入后，鼠标点击其他处，会自动弹出“E:\---不存在，要创建它吗？”单击“确定”， 再选择“手动”或“前缀/计数器”。　　

2.2.2. 编辑序列表：　　

编辑序列表：在“序列”菜单中选择“序列表”，在表格中可进行“插入”、“剪切”、“复制”、“粘贴”、“追加行”等操作，表格中必须填写“样品瓶”、“样品名称”、“方法名称”、“进样次数”、“数据文件”、“进样量”等信息，其他信息可选择编辑。编辑完成后，单击“确定”。 在“序列”菜单中选择“序列模板另存为”，为新建序列命名。　　

2.2.3. 运行序列：　　

色谱柱安装完成后，在“仪器”菜单中选择“系统开启”或单击界面右侧绿色的“打开”快捷键，平衡色谱柱，等基线平稳，在“仪器”菜单中选择“运行序列”。停止采集数据选择“仪器”菜单中 “停止运行/进样/序列”。　　

3. 数据分析方法编辑:　　

3.1. 打开“仪器1脱机”。从“视图”菜单中，单击“数据分析”进入数据分析界面。　　

3.2. 从“文件”菜单选择“调用信号”，选中您的数据文件，单击“确定”。　　

3.3. 做谱图优化，从“图形”菜单中选择“信号选项”选项，根据自身需要选择合适项，如：从范围中选择自定义量程设置合适的时间范围和响应范围，或调整，反复进行，直到图的比例合适为止。　　

3.4. 积分:　　

从“积分”菜单中选择 “积分事件”，设置合适积分参数 “斜率灵敏度”，“峰宽”，“最小峰面积”，“最小峰高”等项。点击“积分”菜单中“积分”， 则数据被积分。　　

如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。　　

单击左边“√”图标，将积分参数存入方法。　　

3.5. 打印报告:　　

从“报告”菜单中选择“设定报告”选项。选择需要的报告类型。　　

从“报告”菜单中选择“打印报告”，则报告结果将被打印出来。　　

4. 关机:　　

4.1. 关机前，用95%水冲洗柱子和系统0.5-1小时，流量0.5~1ml/min，再用100%有机溶剂冲0.5小时，然后关泵，（适于反相色谱柱）。[正相色谱柱用适当的溶剂冲洗]　　

4.2. 退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机。　　

4.3. 关闭全部电源，稳压器等。　　

5. 注意事项：　　

5.1. 氘灯是易耗品，应最后开灯，不分析样品即关灯；　　

5.2. 开机时，打开冲洗阀，100%水，泵流量3ml/min，若此时显示压力 >10bar，则应更换排气阀内过滤白头。　　

5.3. 流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）。　　

5.4. 配制10%异丙醇，以每5分钟进行0.2分钟的自动seal-wash即可，用缓冲盐时必须开启seal-wash。