【分享】如何选择适合的色谱柱

对于色谱柱类型的选择有一些特殊说明：

1.反相柱是使用最广泛的色谱柱，而ODS又是反相柱中使用最广泛的，据统计目前使用的色谱柱中超过一半是ODS柱；由于ODS柱的技术最成熟，所以具有高性能、长寿命等特点，所以选择时优先选择ODS柱；

2.对于反相柱，通常来讲，碳链越长，对化合物的保留越强，分离效果也越好，但选择短碳链的键合相可以节约分析时间；

3.反相色谱柱可以对非极性、弱极性、中等极性以及部分强极性化合物进行分离，是应用最广的色谱柱；反相色谱柱以“分配作用”保留分析物，主要以分析物在两相中的溶解性进行选择，有时不能对同分异构体和结构类似物进行分离；

4.部分解离性较弱的化合物，可通过向流动相加入酸、碱、盐的形式使分子以某种稳定并且保留性强的形式存在，然后用反相柱进行分析，这种分析方法包括“离子抑制色谱”和“离子对色谱”；

5.PLRP是以聚苯乙烯-二乙烯基苯为填料的色谱柱，为反相柱，疏水性与C18相近，但不具有次级相互作用，分析碱性化合物时不会发生拖尾。

6.包括Silica、氨基柱、氰基柱在内的正相色谱柱，分别通过硅羟基、胺基、氰基与分析物中的极性基团发生极性相互作用，从而实现对分析物的保留和分离，适用于极性化合物的分离，对许多同分异构体和结构类似物也能实现较好分离。

3、对填料的要求

1）填料类型 普通的硅胶键合相色谱柱在流动相pH处于2～7.5范围时表现稳定，超出这一范围就会发生键合相水解(pH < 2)或硅胶溶解(pH > 7.5)等现象，因而具体到那一款色谱柱的选择时，应保证填料所能耐受的pH范围符合分析条件的要求。色谱耗材制造公司通过改进键合技术，已经制造出pH适用范围较宽的硅胶键合相色谱柱，比如Diamonsil

(2)能够耐受1.5～9的pH值，可以满足绝大多数情况下的反相色谱分析。 PLRP为聚合物基质的反相填料，由于不存在上述水解和溶解的危险，因而能够在各种PH值下使用，是目前PH值适用范围最宽的色谱柱，其主要缺点是柱效较低，重现性差、在有机相中易发生溶胀等。



2）填料粒径 目前分析中大多使用粒径为1.7～5 μm的填料。根据速率理论，塔板高度与填料的粒径近似成正比，因而减小填料粒径可以得到更高的柱效，当分离效果不理想时可以考虑使用更细的填料；使用细粒径填料时，柱长可适当缩短，以提高分析速度；使用细粒径填料时，高的柱效有效抑制了色谱峰的展宽，能够获得较高的分析灵敏度；细粒径填料会显著增大柱压。分析者可根据对柱效、分析时间和分析灵敏度的要求对填料粒径进行选择。



3）填料的孔径 填料的孔径对化合物的分子量具有限制。孔径为100 Å左右的填料仅能用于相对分子量不超过2000的化合物的分离，更大的分子难以进入孔内，在填料上的保留较弱，需要使用孔径更大的填料，比如300 Å。



4、色谱柱规格

(1) 内径 在理想情况下，当填料、柱长和流动相优化线速度确定时，色谱柱内径的变化将只影响上样量和灵敏度，柱效、分离度、分析时间等均不发生变化。与内径为4.6 mm的色谱柱相比，内径为2.1 mm的色谱柱的截面积仅相当于前者的1/5，所以为取得相同的线速度，后者所需的体积流速仅为前者的1/5，因而使用细径柱能显著减少溶剂用量；同样由于截面积小，样品组分在细径柱中的稀释也较小，可以得到较高的灵敏度；细径柱的最大载样量也相应减小。 归纳起来，细径柱的优势就在于节约溶剂，灵敏度高，与质谱检测器的兼容性更好，适用于低样品量分析，但细径柱对硬件要求更高。

(2) 长度 单组份或组分较少时，用短柱即可达到较好的分离；组份较多时，则应选择长柱。当然以上只是对于最常使用的5 μm填料的色谱柱而言，如果选择了细填料的柱子，柱长可以短一些，比如，150 mm、3 μm色谱柱的柱效相当于250 mm、5 μm的色谱柱。



注：选择细内径柱或和较短色谱柱时，由于色谱柱的死体积较小，柱外效应的影响会增大，造成柱效下降。这种情况下，应选择短而细的连接管，如果有条件还可更换体积较小的进样阀和流通池。

色谱柱选择实例分析

色谱柱选择实例分析

谢谢，学习了

非常不错哈

我们通常用的都是C18柱。