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【求助】液相检测 流动相问题,请教大家!!

  • bluewonjdeer
    2011/04/28
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 反向转化成正相后的出现的问题

    在下于前段时间就“反相转化为正相”请教了各位前辈高人,并在大家的指点下把系统转化成了正相,现在用此系统做正相出现了问题:1、进样品,保留时间为22分钟左右,峰型还算正常,面积在1700左右。2、进标准品,在22分钟左右出来个小得几乎看不见的峰。

    以下是本人的具体操作:大家看看是否有不当之处。原反相系统流动相为甲醇:水=95:5,用的C18的柱子,检测波长为265,本人先用纯甲醇以1.0的速度冲系统和C18柱子1小时,再把C18柱子取下,接上双通,用异丙醇冲系统1小时,然后接上硅胶柱(2年未用过了)用正己烷冲柱子和系统1小时,以正己烷:正戊醇=997:3为流动项冲柱子1小时,然后进样(样品和标准品的配制见中国药典2010版维生素D的检测)

    求高手指点,问题出在哪里?
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  • opliuy

    第1楼2011/04/28

    没有换成正相做过,太麻烦了。你可以找本叫液相色谱概论的书看看,那上面应该有详细的反相改正相的办法。好像你的方法太简单了。

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  • 土著波波

    第2楼2011/04/30

    我们做手性药物的时候经常转正相,看你的操作,第一感觉就是你没好好的冲系统,反相转正相对于系统的冲洗要充分,首先系统接上两通用纯水1ml每分钟,半小时,期间空进样三次,以冲洗定量环;然后甲醇2ml每分钟20分钟,同样也要冲洗定量环;观察基线,然后换异丙醇1ml每分钟,半小时,同样冲洗定量环,然后换实验所使用正相柱的保存液1ml每分钟冲十五分钟,接柱子平衡,最后换实验流动相平衡。
    还有,要清洗进样口,最后也是比较重要的,你用的仪器类型,一般岛津的液相可以直接反相转正相,但安捷伦的要注意一般是不可以的,具体看你的什么仪器。

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