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【求助】Agilent液相四元泵压力的问题（5月6日更新）-基本解决问题，但还是有一点疑惑

wwl616

2011/05/03

液相色谱（LC）

这个51节全被这个四元泵的问题毁了

我们有一个样品的流动相是
流动相A：0.01mol/L磷酸盐缓冲液-乙腈（85：:15）
流动相B：乙腈
梯度洗脱: A B
0 80 20
10 40 60
11 80 20
15 80 20
之前一直做的时候压力曲线都是下面这个样子

但是在4月29号的时候出现走了2、3针以后压力曲线波动很大

首先考虑的是肯定有气泡或者发生盐析了，跟安捷伦的工程师联系了也基本确定了是这个问题，把主动阀芯清洗了，通路全部用大量的水和有机相混合冲洗，，清洗玻璃滤头，排气泡。。。。。。做完了再走，还是这个样子
安捷伦的工程师说可能是梯度的问题，后面乙腈比例增大了造成盐析加重，建议使用等度，但是结果的压力还是不稳

后面的更是惨不忍睹。

仪器在检测这个样品之前从来没出现过这个问题，一直以来压力都是如第一张图的样子，做这个样品也有3、4年了
仪器使用过程中有不太规范的地方，个别人员使用不是很规范，但是出现问题了以后检查了各个可能出现问题的部件，甚至换掉了一部分配件，都是新的，但是现在还是不行。

希望各位老师指教！！

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今天看到很多留言，谢谢大家了

现在我把两种流动相混合在了一起，系统的压力恢复正常！
我看了下面有位师兄说可能是由于保养的问题，之前出现这个问题的时候我也考虑过这个问题，也许是我的保养还不到位，但是把它换到我们年初才装好的1200上面去做还是一样的压力不稳，而且是拿到哪台上去做哪台就要出问题，都是压力不稳，所以基本我是排除了是仪器的问题。每台之前都是很好的，虽然用的频率很高，基本都是7*24小时在用，但是基本保养还是比较到位的。关于仪器本身的问题，在出现问题的时候我基本都检查过各个部件了，而且在没掌握确切原因的时候我基本上都把可能出现问题的部件都换了一遍，最后还是问题依旧，所以这一点我排除掉了。
我想了一下，是不是我的两种流动相混合的时候由于梯度的原因，乙腈比例增大，是盐的溶解性降低，而且吸热的效应增大使温度降低造成盐析出加剧，最后在主动阀和出口阀那些地方析出结晶造成压力不稳，有这种可能性吗？我觉得很大。
但是还有一点，也有朋友指出来了，就是方法的问题，可这也是让我最头疼的一个问题，这个样品我们已经做了大概4年的时间，是我们公司生产的一种药物品种，现在是第一次出现这个问题，正常的时候压力曲线就如第一张图所示，保留时间在3.8左右。

现在我们暂时按照混合后的流动相来做样，就是把流动相A和B混合后再做，防止混合乙腈的时候发生降温、盐析，改了之后出峰时间和之前的基本保持一致，重现性能保持在原来一样的水平。

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wuzidun

第1楼2011/05/03

有没试下更换预柱芯？

0

wwl616

第2楼2011/05/03

压力不稳现在就没加预柱了，没加预柱还是一样的情况
wuzidun(wuzidun) 发表:有没试下更换预柱芯？

0

noodle12345

第3楼2011/05/03

乙腈的量大的缘故！

0

wwl616

第4楼2011/05/03

乙腈的量换成多少合适呢？
现在我们用等度来做样品，相比之前梯度的来看乙腈用量小了，但是还是有问题，而且这个样品按这个方法已经做了几年了，按理说不应该啊
noodle12345(noodle12345) 发表:乙腈的量大的缘故！

0

mchank

第5楼2011/05/03

楼主可尝试打开清洗阀，用大流量的HPLC水或流动相冲洗泵流路一段时间，输出阀可取出在纯水中超声清洗。如需要，可更换新的主动阀和拆洗进样阀。最后再用流动相大流量冲。

0

纯度不够

第6楼2011/05/03

个人觉得楼主首先应该考察一下重现性，这几张独立的压力图说明不了什么问题，况且每张只有一针

0

liuweijiang

第7楼2011/05/04

先确认，基线能不能走直，开泵与停泵状态分别试一下。如果这些都不能保证检测器流通池是不是脏

0

shengwei99

第8楼2011/05/04

更换单向阀就好了

0

tanninghui6000

第9楼2011/05/04

进来学习学习

0

zhengchao5211

第10楼2011/05/04

怎么感觉还是进了气泡的缘故，可以尝试把电磁阀那里拧松一下，然后拧紧，多排一段时间，发生盐析的话就要考虑单向阀的宝石球是不是呗盐给磨损了导致压力不稳

0

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