supreme
第3楼2011/05/08
选择缓冲液的步骤
1 .确定最佳分离状态时的流动相pH
2 .选择具有与流动相的pH相近的pKa 的缓冲液(即使浓度稀也具有较强能力的缓冲液)
3 .确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收
(在波长210nm附近进行检测时,不能用醋酸和 柠檬酸的缓冲液)
在色谱分析过程中常常需要使用缓冲盐来调节流动相的pH 值,缓冲盐的不当使用对色谱柱可能造成柱压升高、柱效下降以及使化合物的保留时间发生变化等影响:
1)柱压升高;
原因:缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出,堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙,阻碍流动相传质,引起柱压升高。
2)相同化合物的保留时间发生变化;
原因:如果没有冲洗干净就进行进样,色谱柱内含有的盐会使化合物的保留时间发生变化。
3)柱效下降;
原因:
i 有些缓冲盐会渗入到键合相的深处,损害硅胶基体,导致色谱柱键合相流失,柱床变松,柱效下降;
ii 凝结在键合相表面,使C18 碳链难以舒展,对物质的保留能力下降,导致柱效下降。因此用过缓冲盐后需要对色谱柱进行冲洗,水中缓冲盐浓度较大时应特别引起注意。