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【转帖】纠正误区：反相液相色谱柱不是LC-MS/MS分析的主流

heguang

2011/06/15

液相色谱（LC）

对于LC-MS/MS色谱柱人们的惯性思维通常是由反相液相色谱柱开始研发, 产生这种惯性思维是因为常规高效液相色谱分析中C18等反相高效液相色谱柱占有统治地位,另一方面是色谱公司不懂LC-MS/MS分析误导用户的结果。这惯性思维是不正确的!
LC-MS/MS分析的实用战略和HPLC有很大不同! LC-MS/MS分析的方法的选择性最重要!
色谱公司不能简单地将现成的反相液相色谱填料装成5cm x 2.1mm短柱充当LC-MS/MS柱使用, 但事实上几乎所有色谱公司都是这样做的。这样的反相液相色谱 LC-MS/MS柱有三个明显的弱点:
(1) 许多极性化合物难以保留，质谱灵敏度差。
许多重要的物质，如抗癌药物DTIC, 抗痛药物河豚毒素，污染物质三聚氰胺, 中草药中糖肽等非常极性, 在反相液相色谱柱上没有保留。还有许多的化合物比较极性, 使用少量的甲醇或乙腈就从反相液相色谱柱上洗脱。在药物代谢研究中, 观察到许多化合物自己疏水, 但代谢产物亲水的情况。甲醇或乙腈含量低, 离子化程度低, 质谱灵敏度差。所谓水相C18柱在LC-MS/MS分析中没有价值。
(2) 用常规反相色谱填料装成2.1mm内径的色谱柱在LC-MS/MS和LC/MS应用中常陷入记忆效应（Carryover Effect）的“陷阱”
LC-MS/MS和LC/MS应用中另一个重大问题是记忆效应（Carryover Effect）。记忆效应是指在进样后, 再进一针空白在同样的保留时间仍然观察到化合物峰。记忆效应的副作用是明显的: 它可能人为地增加下一样本的MRM信号, 影响定量分析的精密度和准确度。US FDA Bioanalytical Regulatory Guidances限制最高校准标准(highest calibration standard) 的记忆效应不能超过20 ％最低校准标准(lowest calibration standard)MRM信号的20%。
由于大部分色谱公司都使用现成的反相液相色谱填料简单地装成5cm x 2.1mm短柱充当LC-MS/MS柱, 在许多情况下，使记忆效应强, 校准标准曲线范围必须人为缩短, 或不得已在进样后, 再进一针甚至两针空白最小化记忆效应, 然后进下一个样品。所有这些严重地降低了生产效率。
(3) 峰形拖尾或扭曲
因为活性硅醇基无法完全封闭, 许多碱性化合物在几乎所有色谱公司的Cogent Diamond Hydride反相液相色谱柱上面有明显的峰形拖尾。这种峰形拖尾是记忆效应的一个重要的根源。
另一方面，使用不正确方法过分封闭致使一些酸性和两性化合物分离效果不佳, 特别是出现峰失真和分裂现象。
专家认为LC-MS/MS色谱柱和色谱方法的第一选择是亲水色谱(HILIC或)! 亲水色谱使用乙腈作为弱溶剂和水为强溶剂, 彻底解决质谱灵敏度差, 记忆效应等问题。疏水化合物首先流出, 然后是亲水化合物。不仅彻底解决极性化合物难以保留的问题, 而且同时分析了疏水化合物, 也提高了疏水化合物质谱灵敏度。峰形拖尾问题也获得彻底解决。此外，乙腈提取液不需要蒸发和重新溶解，从而节省了大量的时间。另一方面, 反相LC-MS/MS色谱柱和色谱方法仍然重要, 不仅是一些重要的中性化合物如抗癌药物紫杉醇, 抗免疫器官植入药物FK 506和雷帕霉素(rapamycin), 降脂药等必须使用反相LC-MS/MS色谱柱和色谱方法, 还因为大多数客户习惯于反相LC-MS/MS色谱柱和色谱方法。即使这样反相液相色谱填料也必须通过处理才能装成5cm x 2.1mm短柱充当LC-MS/MS柱使用。

分
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有水有渝

第1楼2011/06/16

应助达人

那么当前在LC-MS/MS使用最多的是反相色谱柱还是亲水色谱柱呢，即使经过处理的反相色谱柱也还是反相色谱柱，作者是不是玩了一个概念？

0

hudayaoxue

第2楼2011/06/16

对于作者的说法，完全不敢苟同！

所谓的记忆效应完全是胡说八道！事实上，他所说的记忆效应是进样后在定量环的残留。这是任何色谱都会遇到的问题。由于质谱的灵敏度高，所在进样量比常规HPLC要小。就可以轻松解决这个问题！
　
　所谓的亲水色谱简直是一派胡言！一是没这个概念。所谓亲水性的，应该说极性的或正相的。但LCMS中应用并不是太多。二是如果用乙腈与水作流动相的，则是反相柱。LCMS一般是用这个流动相体系。最多有可能加点挥发性盐类，如：醋酸－醋酸盐。

　我真的不知道从哪里冒出来一个这样的家伙，扰乱视听！也很无知！

　反相色谱柱恰恰就是LCMS分析的主流！

　请版主审核此贴时是否加注一下？此贴应为讨论贴，而不是资料贴。不然，要误导多少初学者？！

0

dahua1981

第3楼2011/06/16

应助达人

液相用的最广泛

0

shbluewave

第4楼2011/06/16

把别人的问题说得太严重,自己的优势又不讲透,不是很好的做法.

0

kylabs

第5楼2011/06/17

楼主是转帖的嘛。怎么有人这么激动？

对LCMS来说，极性分析物的可不是那么容易加离子对试剂就能解决的。HILIC等亲水柱绝对有其优势。
反相柱还是因为LC用的多，LCMS就跟着这么用了。

0

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