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化验室评估报告中微生物相关共性问题摘录---您平时是否有注意到这些细节问题呢

去年冬天

2011/07/13

私聊

食品毒素/微生物检测

项目	检查情况	整改情况
	接种后的平板标识不统一，培养后出结果时易混淆样品、检测项目。微生物大肠菌群检测时，未对培养基、稀释液进行空白对照；盐水未做菌落总数的空白对照实验。超净台空气净度放置时间为15分钟微生物接种培养不做平行样。稀释样品的混匀方法不正确。实验时，吸管尖破损的继续使用，吸样管口破损，使移取液体不准确试管手持方式不正确，看不到液面；拿两只试管时，管口互相接触。吸管中吸入样品后在酒精灯火焰上停留，会将样品中微生物杀死	超净台空气净度从操作开始至操作结束。大肠菌群实验也应同时做大肠培养基、盐水的空白实验。
	从操作开始到倾注平板的时间较长（接种后不能及时加入培养基）。倾注平板时琼脂温度低，倒至底部已凝结。	从操作开始应20分钟倾注一次平板。
	原料奶细菌总数稀释度选择不当，两个稀释度菌落数生长均较多大肠菌群检测第一步和第二步后出具判定结果，不进行第三步的验证实验。

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去年冬天

第1楼2011/07/13

结果报告错误：

固体原料、吸管菌落总数报告为<1cfu/ml，琼脂空白结果为零报告为<1。

空白结果记录在稀释度为10^-³下。

超净台内环境监测结果未做记录。

微生物原始记录内容填写不规范：

例原料B031记录于涂抹、空气降落一栏下，未注明检测项目，只记录1个10倍稀释度；过程记录为600/620，结果报告为6.1×10²，无结果单位（过程数据已乘以10，还是结果报告错误？）

原料奶940号细菌总数万倍稀释后平板菌落记录为80/1200，结果报告为9.0×10⁵

微生物原始记录中，涂抹的单位为个/平皿、大肠菌群单位为个/ml。

技术文件中涂抹细菌总数的单位为cfu/平皿。应为cfu/cm²

微生物接种时，手持两只试管，管口、塞子相接触；瓶塞放于台面、再用。

操作时吸管超出工作台，拔塞时在超净台出风口进行

吸管用后直接放于超净台上。

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私聊

去年冬天

第2楼2011/07/13

琼脂、试管等只盖胶塞、未用厚纸包扎，灭菌后直接暴露在空气中。

微生物所用器皿均应盖胶塞后用厚纸包扎。

微生物室灭菌后人员出入频繁，且不能及时关门。

微生物操作间专用工衣、工鞋、工帽配备不齐全。

微生物室安装的紫外灭菌灯高度偏高,灭菌效果的验证做规定。

培养箱未定期使用擦拭消毒。

微生物室、缓冲间未定期进行环境监测。

微生物室、缓冲间应定期进行环境监测，以检查灭菌效果。

培养基使用500ml三角瓶配制，内装400ml培养基。

营养琼脂使用500ml三角瓶配制量为500ml，可能造成灭菌不彻底。

培养基的配制量不能超过容器的2/3；建议培养基用300ml三角瓶高压灭菌，保证灭菌效果

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去年冬天

第3楼2011/07/13

化验员操作考试问题摘录

项目	问题
	高压锅灭菌结束、压力降未降下即打开高压锅
	显微镜使用、维护不够正确
	人员进入无菌室时，未及时更换消毒过的工作服、工作帽及工作鞋；中间出室外时，也未换掉消毒过的工作服、工作帽及工作鞋
芽孢总数	不清楚紫外灯对环境的消毒时间 -1 样品检测前未混匀 -1 样品容器打开前未进行消毒（酒精擦拭、瓶口未过火焰）-1 试管、琼脂瓶口在拔塞前未过火焰 -1 稀释时所加样品量不准确（加样时洒出、使用试管破损严重），吸管中残留多操作时经常远离火焰区 -1 手持试管方式不正确，看不到液面，两支试管口相接触 -1 吸管中吸入样品后在酒精灯火焰上停留（样品中微生物可能灭活） -1 转移样品时，吸管中样液洒出 -1 检测同时未做相应项目的空白实验、环境监测 -1
芽孢总数	1. 样品检测前未混匀 2.往平皿中加样品时远离酒精灯 3.琼脂从55℃培养箱中取出未冷却即浇平板 (无意识)

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去年冬天

第4楼2011/07/13

大肠菌群	1.操作时超净台前挡玻璃高，未挡住面部 -1 2.样品容器未进行消毒即放入超净台中 -1 3.样品检测前未混匀 -1 4.吸管接吸头前未过火焰 -1 5.吸管中样液洒出，加入平皿中样品量不准确 -1 6.带菌样液洒到超净台面上未做处理 -1 7.未对培养基、盐水做空白对照 -1 8.大肠菌在伊红美兰平板上的菌落形态不清楚 -1 9.划线方法不正确，未形成单个菌落 -1 10.证实实验回答不正确 -1
	1.操作时无菌间空调处于开启状态 -1 2.超净台无前挡玻璃，操作时未戴口罩 -1 3.同时未对培养基、盐水做空白对照 -1 4.移液管未整体通过火焰 -1 5.接种针灭菌不彻底 -1
	1、吸样管清洗不干净、管口破损，使样品量吸取不准确 -1 2、接种操作在酒精灯火焰上方，使菌烧死；样品容器打开后口未对着酒精灯火焰区 -1 3、试管塞拔开再盖时有时未过火焰 -1 4、手部消毒后接触超净台外物品，操作前未重新消毒 -1 5、产气的观察方法不全面 -1 6、接种针灭菌后在划线平板上冷却、划线方法不正确 -1 7、伊红美兰平板上的典型菌落判断回答不正确 -1 8、复发酵培养基的成分不清楚
	1.酒精灯火焰太小 -1 2.需加样品量为0.1ml，样品未经稀释直接加原奶样品0.1ml 于培养基中

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私聊

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第5楼2011/07/13

革兰氏染色	1.革兰氏染色固定目的不清楚 -2 2.涂片后，放入55℃的培养箱中干燥 -2 3.接种环的使用方法不正确 -1 4.水冲方式不正确
	1.原理、各步骤作用不够清楚 -2 2.未加水,直接将菌落涂在载波片上 -1 3.酒精脱色时间长 -1 4.复染时间不正确 -1 5.涂片太厚,镜检未找到菌 -1 6.显微镜的使用、维护不够正确
	1.干燥方式不正确，频繁过火焰 -1 2.涂片不均匀 3.染色步骤中媒染的作用不清楚－1 4.显微镜使用时，选择镜头的转动方式不正确
	1.载玻片从酒精中取出后处理方法不正确，用蒸馏水冲 2.接种针灭菌方法不正确，灭菌不彻底 -1 3.最后一步染色时间不正确，染10秒 -1 4.水冲后用滤纸覆盖在涂菌上吸水 -1 5.染色结果判断不正确

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去年冬天

第6楼2011/07/13

细菌总数
1.吸管中样液洒出，加入平皿中样品量不准确 -1
2.带菌样液洒到超净台面上未做处理 -1
3.琼脂从55℃培养箱中取出未冷却即浇平板 -1
4.琼脂配制量超出规定要求
5.不清楚稀释度的选择、计数规则 -1

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去年冬天

第7楼2011/07/13

微生物实验操作手法统一

1、微生物实验用的各种加塞容器，如试管、稀释液瓶、培养基瓶、培养液管、采样容器等，在高压灭菌前需加塞后再用双层报纸或牛皮纸包扎封口处，以防二次污染。

2接种吸管如未单支包裹，则需使用双层报纸或牛皮纸进行包裹，每捆不超过20支。

3、实验过程，打开过灭菌桶盖或包扎纸的剩余接种器材（如吸管、试管、平皿），不得留做下次使用，则需重新灭菌后再使用。

4、实验过程，打开过包扎纸的剩余实验试剂（如培养基、培养管、稀释液），不得留做下次使用，也不得重新灭菌后再使用。

5、稀释使用的9ml稀释液，需在灭菌后使用时进行分装于试管中，以减少灭菌过程稀释液的损失，造成稀释液量不准。

6、制备225ml稀释液时，需使用300ml的锥形瓶进行盛放。

7、接种用吸头在使用前需用新洁尔灭消毒液进行浸泡消毒，使用时在火焰周围挤捏排气。

8、培养基、大肠培养管高压灭菌后，保存时间超过24h时，需低温冷藏，但冷藏最长时间不得超过1周。

9、有霉菌、酵母菌生长的培养皿需先经高压灭菌处理后再清洗。

10、接种后的实验器材、样品要及时撤出超净台。

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第8楼2011/07/13

11、常规试验后的接种器材不需浸泡于消毒液中消毒，如进行致病菌试验，

其接种后器材需浸泡于消毒液中进行消毒后再清洗。

12、对微生物室进行紫外线灭菌前，先配置对操作员手部、抹布等进行消毒的新洁尔灭

消毒液，并放入微生物室，以便同时对其盛放容器外壁进行消毒。

二、操作过程

1、操作前，先使用新洁尔灭消毒液清洗操作员手部、抹布及表面未经灭菌的样品

（开口处用酒精棉消毒）。

2、接种的灭菌吸管是否过火焰灭菌、过1-2次、需转动（在上1/3处打）

3、加完样品后塞容器时，瓶口（或管口）、瓶塞（或管塞）需通过火焰灭菌。

4、酒精棉对样品擦拭消毒时，需从开口端向周围方向擦拭（由将开口的内部向外擦）。

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去年冬天

第9楼2011/07/13

三、培养过程

1、培养箱内部每月至少1次用消毒液进行擦拭（须切断电源后擦拭）。

2、微生物培养箱内不得存放除培养皿之外的其它物品。

3、无菌室每月至少1次进行紫外线照射2小时以上的消毒。

四、空白对照

1、每批实验时，需对超净台内空气进行对照监测。

2、每周至少1次对无菌室内空气进行对照监测。

3、每2周至少1次对培养室或缓冲间内空气进行对照监测。

4、超净台空气降落空白试验结果大于4cfu/平板时，需及时查找原因、采取措施。

如对平皿、培养基、超净台空气过滤系统、紫外灭菌灯等进行检查。