yiyaoyy
第3楼2011/08/31
使用异丙醇冲洗之前和之后要用什么样的溶剂来置换呢?我之前使用完毕后, 柱子保存在纯乙腈中,因为今天要用,所以昨天晚上用异丙醇0.2的流速正向冲洗了1.5小时, 后用100%乙腈0.5流速冲洗了4小时, 可是今天使用的时候, 发现压力升到了3400,(上次使用的时候是3100左右),不知道使用异丙醇的时候要用什么样的梯度,是不是我的操作有疏忽?但是看很多资料都是这么说的, 使用完异丙醇后,用纯乙腈冲洗就可以了, 而且今天使用的时候, 发现我的图谱基线很不稳, 进样之前很好, 开始走样品后就不行了, 噪音很大,不知道是什么原因。我今天的样品还是用0.45的膜过滤了的!!
yiyaoyy
第5楼2011/09/02
菲罗门的柱子工程师说可以反冲,我用的小流速反冲的,柱子的分离度和塔板数没有下降!塔板数还在10500左右, 跟原来一样。确定是柱子的问题, 不是系统的问题。
之前原料药确实是没有过膜,就是用纯乙腈溶,然后超纯水稀释至刻度,就直接进样了。如果是柱子被样品堵塞了, 有什么好的解决方法吗?我昨晚用75%的乙腈小流速反冲了一晚上, 柱压没有丝毫的改变!之前10%~100%乙腈梯度洗脱也用过了,也没有效果!
所有应该注意的地方都注意了, 但是我们这里原料药大家都是不过膜直接用,从来没有出现这种情况,所以我一直没有对样品过滤,我现在也担心是样品里面有杂质,或者溶解性不是特别好, 有少量析出,梯度洗脱、异丙醇小流速冲洗、小流速反冲等常规方法都用过了,都没有起色, 我正在考虑是不是要把柱头卸下来超声,不知道有没有哪位大侠有更好的方法!先在此谢过了!