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液相质谱相对定量一定要用内标吗?急急急!!!

液质联用(LCMS)

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  • 大家好,
    我是做代谢组的,用的安捷伦QTOF6520,分析软件用的MPP,想问一下,我想知道,相对定量即只是想知道处理组和对照组之间代谢物的差异,上下调关系,可不可以不用内标,这么做是否准确,谢谢

anyizhimin 2011/11/11

做代谢组学的相对定量完全没有必要用内标。 原本就是以各个通道的色谱面积总和为100%,计算各物质的相对面积比。不同物质在质谱中的响应原本就有较大差异,所以才叫相对定量。内标的加入完全没有意义,反而是添乱。 关键就是三点:1.基质相同。最好是来源于同一生物体的前后对照。 2.色谱分离度好。要把不同物质充分分离,不然代谢组学根本做不清。 3.各物质定性准确。尤其是在结构推测时,首先推测的化合物要全面,然后根据根据分离检测的结果慢慢挑,刚刚开始做这个方面时,这个过程比建立一个定量方法艰难痛苦多了。 楼上的大概全部是做定量的多吧,内标法是做定量的思路,相对定量更偏重定性方面呢。 不知楼主做的代谢组学是哪个方向的。如果以药物而言的话,要代谢物的总量超过药物总量的三分之一以上才考虑其意义,尤其还要验证其是否具有生理活性,没有生理活性的,只能算作其主要的代谢方式,具体的意义不大。当然,如果搞研究的话,可以和什么酶的活性啊,蛋白表达啊,基因多态性结合起来做。 总之,相对定量的那个所谓定量是很粗泛的,内标就不要加了。

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  • 论坛版主招募|新窦

    第1楼2011/11/10

    定量没有要求非要用内标,也是可以用外标法的。

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  • tangtang

    第2楼2011/11/10

    内标是校正前处理的回收率的吧。

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  • 菜头

    第3楼2011/11/11

    内标是做液质最省事也最保险的做法,最好是同位素内标。
    前处理的回收率可以通过加标回收实验做出来。
    基质效应可以通过基质加标的校正曲线来消除基质的影响。最可靠的做法是从前处理开始,偷懒的办法是用空白基质来稀释标准溶液。

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  • anyizhimin

    第4楼2011/11/11

    做代谢组学的相对定量完全没有必要用内标。
    原本就是以各个通道的色谱面积总和为100%,计算各物质的相对面积比。不同物质在质谱中的响应原本就有较大差异,所以才叫相对定量。内标的加入完全没有意义,反而是添乱。
    关键就是三点:1.基质相同。最好是来源于同一生物体的前后对照。
    2.色谱分离度好。要把不同物质充分分离,不然代谢组学根本做不清。
    3.各物质定性准确。尤其是在结构推测时,首先推测的化合物要全面,然后根据根据分离检测的结果慢慢挑,刚刚开始做这个方面时,这个过程比建立一个定量方法艰难痛苦多了。
    楼上的大概全部是做定量的多吧,内标法是做定量的思路,相对定量更偏重定性方面呢。
    不知楼主做的代谢组学是哪个方向的。如果以药物而言的话,要代谢物的总量超过药物总量的三分之一以上才考虑其意义,尤其还要验证其是否具有生理活性,没有生理活性的,只能算作其主要的代谢方式,具体的意义不大。当然,如果搞研究的话,可以和什么酶的活性啊,蛋白表达啊,基因多态性结合起来做。
    总之,相对定量的那个所谓定量是很粗泛的,内标就不要加了。

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  • jinshuai

    第5楼2011/11/14

    非常感谢你的回答,我是做天然产物的,是做的柑橘,主要现在做的是处理组和对照组,代谢产物的差异表达,听你这么说,我应该是可以不需要要内标了,谢谢你的回答哦

    anyizhimin(anyizhimin) 发表:做代谢组学的相对定量完全没有必要用内标。
    原本就是以各个通道的色谱面积总和为100%,计算各物质的相对面积比。不同物质在质谱中的响应原本就有较大差异,所以才叫相对定量。内标的加入完全没有意义,反而是添乱。
    关键就是三点:1.基质相同。最好是来源于同一生物体的前后对照。
    2.色谱分离度好。要把不同物质充分分离,不然代谢组学根本做不清。
    3.各物质定性准确。尤其是在结构推测时,首先推测的化合物要全面,然后根据根据分离检测的结果慢慢挑,刚刚开始做这个方面时,这个过程比建立一个定量方法艰难痛苦多了。
    楼上的大概全部是做定量的多吧,内标法是做定量的思路,相对定量更偏重定性方面呢。
    不知楼主做的代谢组学是哪个方向的。如果以药物而言的话,要代谢物的总量超过药物总量的三分之一以上才考虑其意义,尤其还要验证其是否具有生理活性,没有生理活性的,只能算作其主要的代谢方式,具体的意义不大。当然,如果搞研究的话,可以和什么酶的活性啊,蛋白表达啊,基因多态性结合起来做。
    总之,相对定量的那个所谓定量是很粗泛的,内标就不要加了。

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  • xihe

    第6楼2011/11/15

    有时候对定量没有太大要求的时候加内标,为的是看看仪器跑样品的时候有没有出现什么问题,状态稳不稳定

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