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液质基质曲线线性不好

  • semibeauty
    2011/11/29
  • 私聊

液质联用(LCMS)

  • 三聚氰胺检测做基质曲线,结果线性很差,具体怎么操作?

    我的操作是取5份阴性奶粉按方法处理,再吹干之前加入标准,然后吹干定容。。

    不知道各位是怎么做的,求指教

    不用基质曲线发现基质效应很强
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  • zhc609

    第1楼2011/11/29

    现行不好有很多原因,首先要确定仪器的稳定性,看看仪器的重现行怎样?线性范围的选择也很重要。另外,质谱受基体影响很严重,建议你采用内标法。

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  • zhc609

    第2楼2011/11/29

    液质质测三聚氢最好用HiLICI 液相色谱柱。普通C18是不能保留它的。基体影响更严重。

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  • semibeauty

    第3楼2011/11/29

    这个我知道,柱子没问题的,流动相曲线线性可以,基质曲线不行

    zhc609(zhc609) 发表:液质质测三聚氢最好用HiLICI 液相色谱柱。普通C18是不能保留它的。基体影响更严重。

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  • semibeauty

    第4楼2011/11/29

    考虑用内标法,不过内标还没到。国标是外标法基质曲线,说明外标法问题应该不大

    zhc609(zhc609) 发表:现行不好有很多原因,首先要确定仪器的稳定性,看看仪器的重现行怎样?线性范围的选择也很重要。另外,质谱受基体影响很严重,建议你采用内标法。

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  • anyizhimin

    第5楼2011/11/29

    由于个人并不是做食品检测方向的,所以只能提出参考意见。
    楼主所描述的情况确实很可能是由于严重的基质效应引起的。
    建议楼主做一个实验,然后根据结果进行调整。
    首先,配制一条无基质的对照品标曲(工作液),浓度范围请大于目前含基质的标曲范围。并请每个浓度进样三次以上。计算该标曲线性,确保线性范围在仪器的检测限内。
    其次,制备空白基质样品若干,添加入工作液,制备成与工作液标曲同浓度的样品标曲,各浓度样品数量应大于六个。进样后,计算各含基质样品浓度的面积的RSD,这个是相对基质效应,应小于15%。相对基质效应影响重现性若严重,最好优化一下色谱条件,减少基质效应,改变前处理方法也能减少基质效应,但是比较麻烦,偶尔改变质谱条件也能减少基质效应。
    各浓度含基质样品的峰面积与工作液的峰面积之比为绝对基质效应,各浓度基质效应的极差应该小于15%(这个是个人观点)。特别偏离的浓度就应该删除,所以楼主原本的标曲可能范围要缩小一些。绝对基质效应越小,方法可能重现性、稳定性、以及线性范围会越好。

    至于内标,同位素内标可以同时修正前处理和基质效应带来的差异,所以当使用同位素内标时,可以不考察基质效应,但是普通内标只能修正前处理带来的误差,对基质效应没有实际意义。
    如果要用内标法,内标也需要考察基质效应,但是由于内标的浓度是不变的,所以只要确定其相对基质效应即可。

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  • semibeauty

    第6楼2011/11/30

    谢谢你的耐心解答。。。基质效应的实验做过,基质效应蛮严重的,所以才用基质曲线,不过做过几次都是线性不怎么好。。所以想问问做基质曲线的方法我的做法对不对。。之前也按此方法做过其他项目,结果还可以。。实在不行就只能用同位素内标了。。hillic柱子个人觉得比一般C18娇气一点,无奈

    anyizhimin(anyizhimin) 发表:由于个人并不是做食品检测方向的,所以只能提出参考意见。
    楼主所描述的情况确实很可能是由于严重的基质效应引起的。
    建议楼主做一个实验,然后根据结果进行调整。
    首先,配制一条无基质的对照品标曲(工作液),浓度范围请大于目前含基质的标曲范围。并请每个浓度进样三次以上。计算该标曲线性,确保线性范围在仪器的检测限内。
    其次,制备空白基质样品若干,添加入工作液,制备成与工作液标曲同浓度的样品标曲,各浓度样品数量应大于六个。进样后,计算各含基质样品浓度的面积的RSD,这个是相对基质效应,应小于15%。相对基质效应影响重现性若严重,最好优化一下色谱条件,减少基质效应,改变前处理方法也能减少基质效应,但是比较麻烦,偶尔改变质谱条件也能减少基质效应。
    各浓度含基质样品的峰面积与工作液的峰面积之比为绝对基质效应,各浓度基质效应的极差应该小于15%(这个是个人观点)。特别偏离的浓度就应该删除,所以楼主原本的标曲可能范围要缩小一些。绝对基质效应越小,方法可能重现性、稳定性、以及线性范围会越好。

    至于内标,同位素内标可以同时修正前处理和基质效应带来的差异,所以当使用同位素内标时,可以不考察基质效应,但是普通内标只能修正前处理带来的误差,对基质效应没有实际意义。
    如果要用内标法,内标也需要考察基质效应,但是由于内标的浓度是不变的,所以只要确定其相对基质效应即可。

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  • Longer

    第7楼2011/11/30

    hilic柱子平衡时间是否够?流动相选择和配制是否正确?是否调整梯度把出峰时间调离基质效应严重区域。

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  • lqhurrian

    第8楼2011/11/30

    吹干定容后再用定容液配制标准溶液

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  • 小猪飞飞

    第9楼2011/11/30

    基质干扰是抑制效应吗?空白做了吗?在出峰时间的位置是否有干扰?

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  • semibeauty

    第10楼2011/12/01

    开始用等度,保留时间重现性比较好,只是响应会逐渐降低。。后来调整为梯度洗脱,每一针都要平衡比较久的时间,一针样要运行40min。。调整梯度后基质效应仍然无法消除

    Longer(ptwx) 发表:hilic柱子平衡时间是否够?流动相选择和配制是否正确?是否调整梯度把出峰时间调离基质效应严重区域。

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