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【极限体验】利用Ultimate柱分析某开放ODS柱色谱样品(11月份)

  • glucosides
    2011/11/30
  • 私聊

厂商论坛

  • 【发贴背景】
    植物的提取分离,跟通常所说的分离纯化是有一定区别的。通常所说的分离,要求很简单:将不同成分“分离开来”就可以了。植物的提取分离不一样,“分离开来”不是目的,最终的目的,是为了得到“分离开来”的各个流分,是为了得到单体化合物。

    【基本过程】
    用一张图片来形容一下这个过程,相信很容易看懂的。此贴的主要内容,是描述用Ultimate柱分析某开放ODS柱色谱样品。通过得到的分析结果,来决定这些流分下一步将要采取的分离手段(非唯一)。


    由一个流分,变成下面这些流分(这还算少的,呵呵)


    【仪器试剂】
    水:重蒸水
    甲醇:
    色谱纯,天津大茂
    HPLC:SHIMADZU LC-10AT、SHIMADZU SPD-10A

    【色谱条件】

    色谱柱:Ultimate XB-C18柱(5μm, 4.6x250mm)
    流动相:甲醇/水(V:V),梯度洗脱
    起始浓度:30%;梯度:20min--50%
    流速:1.0ml/min
    波长:230nm
    柱温:柱温箱25度

    【实验结果】
    特别声明:本实验不是为了将各个峰进行分离,只是为了纯粹地分析,搞清楚其所含有的成分,然后决定下一步的分离手段。所以,有些峰没有分开,这不是我所关心的,我的目的,不是分离,而是单体化合物。这个贴子,是在达到目的的漫漫路途中的一小步而已。

    这是第2个流分,依据分析图谱给出的信息,下一步可能采取PHPLC的手段进行分离,对保留时间为5.3min、5.9min(含2个成分)、7.4min处的峰进行累积。5.3min和7.4min处对应的峰,极有可能成为两个单体化合物。


    这是第4个流分,其中5.3min、5.9min、7.4min的峰跟第2个流分仍有些交叉,但其主要流分是8.95min和12.14min处对应的峰,下一步将采用PHPLC的方法对其进行分离,不出意外,应该得到至少两个单体化合物。


    这是第7个流分,分析结果表明,此样品具有两个主峰(保留时间分别为14.7min和16.1min)。由于众小峰较多,受它们影响,直接采用PHPLC的方法进行纯化是不太现实的。因此决定采用凝胶柱色谱的方法作为下一步纯化的方法,以除去各个小峰再作打算。


    【小结与讨论】
    1. 不要讨论各个峰没有进行很好地分离,我不需要。很好地分离、分开了又如何?我不是做分析,我要的是单体化合物。这个目的实现不了,什么都是浮云。

    2. 有些图跑了20分钟,有些图跑了25分钟。跑了20分钟的,是因为我确信后面没有“东西”了(跟对样品的了解程度有关),再跑也是浪费时间。所以,时间不一。

    3. 吸收强度有大有小,当然是因为进样量不一样,吸收强度的大小,我不关心,理由:参考第1条小结与讨论。

    4. 其它该讨论的,在贴子中讨论得差不多了。

    5. 如果有疑问,或者想要了解什么内容,请回贴。



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  • glucosides

    第1楼2011/11/30

    沙发占了,有用。

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  • 冷冷的冰雨

    第2楼2011/12/01

    赶上末班车了

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  • 冷冷的冰雨

    第3楼2011/12/01

    楼主说:有些图跑了20分钟,有些图跑了25分钟。跑了20分钟的,是因为我确信后面没有“东西”了(跟对样品的了解程度有关),再跑也是浪费时间。所以,时间不一。
    你可以在走完20分钟后用高浓度的有机溶剂再走上5分钟就知道后面有没有东西了,附上图谱更有说服力

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  • 冷冷的冰雨

    第4楼2011/12/01

    1. 不要讨论各个峰没有进行很好地分离,我不需要。很好地分离、分开了又如何?我不是做分析,我要的是单体化合物。这个目的实现不了,什么都是浮云。

    峰分离不好有可能是峰中有峰,这样就需要做一下光谱进行确认,分离不好的峰是不是单一成分,如果不是,峰分离的分离好坏对于得到到是否为单体化合物是有影响的。

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  • glucosides

    第5楼2011/12/01

    NO,我不会做这种麻烦事的
    事实上,我只要自己心里有数就行了
    不需要证明给别人看啊,毕竟要分单体的是我

    冷冷的冰雨(xy4585618) 发表:楼主说:有些图跑了20分钟,有些图跑了25分钟。跑了20分钟的,是因为我确信后面没有“东西”了(跟对样品的了解程度有关),再跑也是浪费时间。所以,时间不一。
    你可以在走完20分钟后用高浓度的有机溶剂再走上5分钟就知道后面有没有东西了,附上图谱更有说服力

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  • glucosides

    第6楼2011/12/01

    这当然,光凭一个单一峰形,很明显不能判断是不是单一物质
    光谱的事,是后续实验的事,别说光谱了,经过光谱确认的,也未必就是单一物质
    这样的情况,太常见了。此贴只是分析,是漫长路途中的一小步。

    冷冷的冰雨(xy4585618) 发表:1. 不要讨论各个峰没有进行很好地分离,我不需要。很好地分离、分开了又如何?我不是做分析,我要的是单体化合物。这个目的实现不了,什么都是浮云。

    峰分离不好有可能是峰中有峰,这样就需要做一下光谱进行确认,分离不好的峰是不是单一成分,如果不是,峰分离的分离好坏对于得到到是否为单体化合物是有影响的。

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  • glucosides

    第7楼2011/12/01

    什么时候出数据就什么时候发贴啊
    反正资品是累积的,无所谓先后了

    冷冷的冰雨(xy4585618) 发表:赶上末班车了

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  • 冷冷的冰雨

    第8楼2011/12/01

    楼主太自信了!
    你按照我说的去做,20min中后肯定还有峰,不信你试试

    glucosides(glucosides) 发表:NO,我不会做这种麻烦事的
    事实上,我只要自己心里有数就行了
    不需要证明给别人看啊,毕竟要分单体的是我

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  • samanthalas

    第9楼2011/12/01

    ODS开放柱是怎么做的啊?你怎么知道某个流分出来了,该去接了啊?

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  • samanthalas

    第10楼2011/12/01

    居然流分4里面还有流分2的东西,看来开放柱相当不准确了!

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