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[转帖]：液相出峰异常解决方法

液相色谱（LC）

  • 诊状
    (一)保留时间变化
    可能的原因 : 解 决 方 法
    1.柱温变化 : 柱恒温
    2.等度与梯度间未能充分平衡 : 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱
    3.缓冲液容量不够 : 用>25mmol/L的缓冲液
    4.柱污染 : 每天冲洗柱
    5.柱内条件变化 : 稳定进样条件,调节流动相
    6.柱快达到寿命 : 采用保护柱
    (二)保留时间缩短
    可能的原因 : 解 决 方 法
    1.流速增加 : 检查泵,重新设定流速
    2.样品超载 : 降低样品量
    3.键合相流失 : 流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向
    4.流动相组成变化 : 防止流动相蒸发或沉淀
    5.温度增加 : 柱恒温
    (三)保留时间延长
    可能的原因 : 解 决 方 法
    1.流速下降 : 管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡
    2.硅胶柱上活性点变化 : 用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱
    3.键合相流失 : 流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向
    4.流动相组成变化 : 防止流动相蒸发或沉淀
    5.温度降低 : 柱恒温
    (四)出现肩峰或分叉
    可能的原因 : 解 决 方 法
    1.样品体积过大 : 用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%
    2.样品溶剂过强 : 采用较弱的样品溶剂
    3.柱塌陷或形成短路通道 : 更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件
    4.柱内烧结不锈钢失效 : 更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品
    5.进样器损坏 : 更换进样器转子
    (五)鬼峰
    可能的原因 : 解 决 方 法
    1.进样阀残余峰 : 每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗
    2.样品中未知物 : 处理样品
    3.柱未平衡 : 重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)
    4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) : 每天新配,用抗氧化剂
    5.水污染(反相) : 通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水
    (六)基线噪声
    可能的原因 : 解 决 方 法
    1.气泡(尖锐峰) : 流动相脱气,加柱后背压
    2.污染(随机噪声) : 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂
    3.检测器灯连续噪声 : 更换氘灯
    4.电干扰(偶然噪声) : 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)
    5.检测器中有气泡 : 流动相脱气,加柱后背压
    (七)峰拖尾
    可能的原因 : 解 决 方 法
    1.柱超载 : 降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相
    2.峰干扰 : 清洁样品,调整流动相
    3.硅羟基作用 加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品
    4.柱内烧结不锈钢失效 : 更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品
    5.柱塌陷或形成短路通道 : 更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件
    6.死体积或柱外体积过大 : 连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管
    7.柱效下降 : 用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱
    (八)峰展宽
    可能的原因 : 解 决 方 法
    1.进样体积过大 : 用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%
    2.在进样阀中造成峰扩展 : 进样前后排出气泡以降低扩散
    3.数据系统采样速率太慢 : 设定速率应是每峰大于10点
    4.检测器时间常数过大 : 设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%
    5.流动相粘度过高 : 增加柱温,采用低粘度流动相
    6.检测池体积过大 : 用小体积池,卸下热交换器
    7.保留时间过长 : 等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱
    8.柱外体积过大 : 将连接管径和连接管长度降至最小
    9.样品过载 : 进小浓度小体积样品
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    +关注 私聊

  • herbman

    第1楼2006/03/29

    谢谢楼主,学习中.

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    +关注 私聊

  • 春雨

    第2楼2006/03/29

    说的不错，总结的很好，希望能把更多的好的经验总结出来让我们多学习，更多的掌握这方面的知识，
    多谢

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    +关注 私聊

  • yjn2005

    第4楼2006/03/29

    搂主真是勤奋，对我们也很有帮助，谢了！

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    +关注 私聊

  • catleome

    第5楼2010/01/05

    谢谢楼主
    太有帮助了
    这个世界需要勤奋细心的人啊

0
    +关注 私聊

  • 20100103

    第6楼2010/01/05

    谢谢楼主
    太有帮助了

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    +关注 私聊

  • sunnyqian

    第7楼2010/01/08

    感谢楼主，好认真哦！

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