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黄曲霉毒素B1的检测

木子

2012/01/31

乳制品检测

黄曲霉毒素M1是黄曲霉产生的毒素，物理化学性质相当稳定，不被巴氏消毒法破坏。哺乳类动物摄入被黄曲霉毒素B1污染的饲料或食品后，通过羟基化作用转化成黄曲霉毒素M1。

黄曲霉毒素B1的简介：黄曲霉毒素是多种霉菌产生的有毒代谢物，主要包括四种呀型（黄曲霉
毒素B1、B2、G1、G2，其中B1毒性最强，是主要的检测类型，但若其
他类型的浓度高，同样具有很大危害性）。它存在于谷物、坚果、棉花
籽及其他食品或饲料中，具有致癌性，可导致人罹患肝癌、黄曲霉毒素
中毒、瑞氏综合征和其他慢性疾病；动物可通过进食被污染的饲料接触
到黄曲霉毒素。因此，大多数国家都限制食品或饲料中黄曲霉素B1的
含量

检测原理：黄曲霉毒素B1检测试剂盒采用固相直接竞争性酶联免疫原理。微孔中包被有对黄曲
霉毒素B1具有高亲和力的抗体。黄曲霉毒素B1酶标物与标准品或样品的黄曲霉毒素
B1竞争结合微孔中包被的抗体。孵育一定时间后，倾倒微孔中的内容物，洗涤非特
异性反应物。随后加入底物试剂，溶液变为蓝色。颜色强度与黄曲霉毒素B1酶标物
的量成正比，与样品或标准品中黄曲霉毒素B1的浓度成反比。最后加入酸性终止
液，终止反应并将微孔中溶液颜色变为黄色，使用酶标仪在450nm下测微孔中溶液
的OD值。比较样品OD值与试剂盒提供的标准品的OD值,即可获得检测结果。

下面带大家检测饲料中黄曲霉毒素B1的含量：

样品处理：
1.稀释孔中+200ul酶标物+100ul标准品/样品

2.混匀吸打，只少3次

3.从每个稀释孔中吸取100ul混合液，转移至相应抗体包被微孔中

4.室温孵育15min

5.孵育完成后，用洗板机洗涤4次

6.根据样品标准品个数计算所需底物体积，将所需底物体积置于单独容器中
然后移取100ul底物至每个微孔中

7.室温下孵育5min（下图是孵育5min后的颜色变化图,颜色由之前刚加入的浅蓝变为深蓝）

8.计算样品和标准品所需终止液的体积，将所需终止液体积置于单独容器中，然后按照与底物
相同的添加顺序和速度，向每个孔中加入100ul终止液

9.用酶标仪在450nm下读取并记录每个微孔的OD值

10.

精
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分
该帖子已被版主-嘟嘟妮小贝加10积分，加2经验;加分理由:值得借鉴

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abcdefghijkl123

第3楼2012/02/01

我们也是用这种方法来检测黄曲霉B1的，不过现在国标要求用液相+衍生化系统来检测啊

0

iycc

第4楼2012/02/01

方法基本一致，我们现在的检测量也很大！

0

kitaro

第5楼2012/02/01

戴手套吧戴手套吧
戴手套吧
戴手套吧
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戴手套吧
戴手套吧
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0

分
该帖子已被版主-木子加3积分，加2经验;加分理由:谢谢提醒~

木子

第6楼2012/02/01

哈哈谢谢这位版友的提醒，以后实验会戴的~
kitaro(kitaro) 发表:戴手套吧戴手套吧
戴手套吧
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0

快乐

第7楼2012/02/01

应助达人

哪家的酶联免疫试剂盒要性价比好些？

0

天天洗碗

第8楼2012/02/01

有快速试纸片法吗？

0

senw

第9楼2012/02/02

呵呵，工作量好大啊！

0

千层峰

第10楼2012/02/02

黄曲霉素检测起来确实很繁琐。。

0

嘟嘟妮小贝

第11楼2012/02/02

我们用的也是酶标法测定的，

0

energy911

第12楼2012/02/02

这个快，国标饲料是用薄层色谱做的，要展开，很麻烦

0

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