仪器信息网APP

选仪器、听讲座、看资讯

立即体验

当前位置：仪器社区 >生命科学仪器 > 电泳仪 > 帖子详情

冰冻切片的免疫组化染色

省部重点实验室

2012/02/22

1. 新鲜组织立即在恒冷冰冻切片机内切片( 也可- 80℃保存)，厚度为 5～6μm。

2. 载玻片可不打底，裱片后，立即用电吹风吹干。

3. 如不马上染色，可密封后- 20℃保存。

4. 染色前用冷丙酮在 4℃固定 10-20 分钟。

5. PBS 洗 2 次，每次 5 分钟，( 必要时应用 0.1%柠檬酸钠+0.1%triton打孔)

6. 3% H₂O₂灭活内源性过氧化物酶，20 分钟，避光；

7. 用 PBS 洗 2 次，每次 5 分钟；

8. 正常血清封闭：从染片缸中取出切片，擦净切片背面水分及切片正面组织周围的水分（保持组织呈湿润状态,）滴加正常山羊或兔血清（与第二抗体同源动物血清）处理，37℃，15 分钟。

附：正常血清配制 ( 或按试剂盒规定的浓度配制)：按 1:20比例，用 PBS 配制，每张切片需要量按 50μ+5μl (10%抛洒量) 计算。

9．滴加第一抗体：用滤纸吸去血清，不洗，直接滴加第一抗体，37℃ 2 小时（也可置于 4℃冰箱过夜）。

10．PBS：5 分钟，2 次（置于摇床）。

11．滴加生物素化的二抗，37℃，40 分钟。

12．PBS：5 分钟，2 次（置于摇床）。

13．滴加三抗（SAB 复合物），37℃，40 分钟。

14．PBS：5 分钟，2 次（置于摇床）。

15．DAB 显色，镜下观察，适时终止（自来水冲终止）。

附：DAB 的配制① 储备液(DAB 25mg/ml)的配制：DAB 250mg + PBS 10ml，待完全溶解后分装成 1ml，100μl，50μl ，20μ l 等，-20℃，冻存。② 工作液：DAB 储备液 20μl + PBS 1000μl + 3% H₂O₂ 5μl

16．自来水（细水）充分冲洗。

17．苏木素复染，室温，30 秒，自来水冲洗。

18．自来水冲洗返蓝，15 分钟。

19．梯度酒精脱水：80%，2 分钟 95%，2 分钟 100%，2 次，5 分钟。

20．二甲苯透明：I ，II （二甲苯）各 5 分钟

21．封片：加拿大树胶（或中性树胶）封片。

相关话题

yuduoling

第1楼2012/02/22

楼主研究的都是微观的

0

分
该帖子已被版主-省部重点实验室加2积分，加2经验;加分理由:谢谢交流常来生命科学版面

近期热榜

热门活动

猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐

品牌合作伙伴

丹纳赫苏州基地打工人的梦想

日立科学仪器

珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）

珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）

日本电子株式会社

赛默飞世尔科技

马尔文帕纳科

上海仪电科仪

梅特勒托利多

布鲁克核磁

举报帖子

点赞用户

好友列表

加载中...

正在为您切换请稍后...