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泪流满面请教各位大侠凝胶色谱中流动相加盐的目的和原理

  • xiaoxin2809
    2012/02/27
  • 私聊

凝胶色谱(GPC)

  • 本人凝胶色谱新手,在做一个项目,需要用凝胶色谱。美国药典论坛上已有方法,重复了人家方法发现有些地方不对,撇开这些不谈,先说说我的疑问吧!
    1 美国药典上的流动相加了0.1M的硝酸钾,我试了一针加的,一针不加的,发现不加盐峰会前沿,加盐的峰很对称,请问在凝胶色谱里加盐的目的除了改善峰形还有什么作用吗?我更好奇的是盐是通过什么原理来改善峰形的?
    2 还有一个很奇怪的现象,我的样品和两个杂质出峰时间重叠,即专属性不合格,这三种物质虽然都是钠盐,但大家请注意样品的分子量范围是1000-2000,而两个杂质的分子量一个是100多,一个是300多,就是说在分离原理为分子排阻的凝胶色谱里,分子量1000多的和100,300的一起出峰,改变流动相(换过纯水,也试过加大有机相比例)变化并不明显,这是为什么呢?难道现在的凝胶色谱已经不是单纯的分子排阻原理了,还是说样品的出峰时间除了和分子量有关,还和他们的水溶性有关?
    3 还有一个现象我不能理解,就是走空白,也就是流动相的时候会出现一些溶剂峰,走样品的时候也会出现溶剂峰,但是样品中的溶剂峰的响应要比溶剂峰里的高多了,这是怎么回事呢?

    这几个问题快把我折磨疯了,请高手解答!!
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  • xiaoxin2809

    第1楼2012/02/28

    都没人理我吗?

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  • xydell

    第2楼2012/02/29

    第二个问题,GPC的柱子不单是有排阻上限的,也有下限,分子量小于排阻下限的就分不开了。可能是这个原因吧,看看你用的柱子说明书。

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  • xiaoxin2809

    第3楼2012/03/01

    关于第二个问题是我没说清楚,是这样,一共有5个物质,一个主成分,是一种低聚糖的钠盐,分子量1000-2000,还有4个杂质,其中两个是钠盐,分子量100多和300多,另外两个是中性分子,分子量100多和1000多一点点,出峰顺序是这样的,主峰先出(1000-2000),紧跟着是两个钠盐的杂质(100多和300多),这三个峰是重合的,再后面是分子量1000多的中性分子,最后为100多的中性分子,我特别不理解为什么两个小分子的钠盐溶液会这么早出峰,和它的存在形式或溶解性有关吗?

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  • 小不董

    第4楼2012/03/02

    应助达人

    加硝酸盐是为了消除化学键的作用,使用GPC,是为了尽量的使用体积排阻,如果有了化学键的作用,就会影响其保留时间,这样体积大的保留时间也会延后,这样测定的结果就不正确了。

    xiaoxin2809(xiaoxin2809) 发表:本人凝胶色谱新手,在做一个项目,需要用凝胶色谱。美国药典论坛上已有方法,重复了人家方法发现有些地方不对,撇开这些不谈,先说说我的疑问吧!
    1 美国药典上的流动相加了0.1M的硝酸钾,我试了一针加的,一针不加的,发现不加盐峰会前沿,加盐的峰很对称,请问在凝胶色谱里加盐的目的除了改善峰形还有什么作用吗?我更好奇的是盐是通过什么原理来改善峰形的?
    2 还有一个很奇怪的现象,我的样品和两个杂质出峰时间重叠,即专属性不合格,这三种物质虽然都是钠盐,但大家请注意样品的分子量范围是1000-2000,而两个杂质的分子量一个是100多,一个是300多,就是说在分离原理为分子排阻的凝胶色谱里,分子量1000多的和100,300的一起出峰,改变流动相(换过纯水,也试过加大有机相比例)变化并不明显,这是为什么呢?难道现在的凝胶色谱已经不是单纯的分子排阻原理了,还是说样品的出峰时间除了和分子量有关,还和他们的水溶性有关?
    3 还有一个现象我不能理解,就是走空白,也就是流动相的时候会出现一些溶剂峰,走样品的时候也会出现溶剂峰,但是样品中的溶剂峰的响应要比溶剂峰里的高多了,这是怎么回事呢?

    这几个问题快把我折磨疯了,请高手解答!!

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