Buffer for EcoR I | 2μl |
Genomic DNA | 3μl |
EcoR I | 0.5μl (10u/μl) |
ddH2O | 14.5 μl |
20μl |
省部重点实验室
第1楼2012/03/03
⑥ 将上清移到另一管中,加入2.5倍体积的-20℃预冷的无水乙醇,0.1倍体积的3M 乙酸钠(pH=5.2),轻轻振荡混匀,室温静置5min;
⑦ 4℃最大速度(13, 000 rpm)离心10~15min;
⑧ 弃上清,尽量除去管壁上的液体;
⑨ 加入1ml -20℃预冷的70%乙醇,轻轻颠倒几次。最大速度(13, 000 rpm)离心5min;
⑩ 除去乙醇,在超净台上平放,将管壁上的乙醇挥发掉,20~40μl ddH2O溶解。-20℃保存。
4、连接。体系如下:
DNA | 2μl |
10×buffer | 10μl |
T4 ligase | 1μl |
ddH2O | 87μl |
100μl |