仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯

CE基础知识系列(3):各种电泳模式的应用

毛细管电泳(CE)

  • 本活动分为5个系列,系列之间的关系或为递进关系或为并列关系。每周一个系列,形式不定,如为竞猜形式则以多对多得不对不得为原则,竞猜期一个星期,一星期后将公布答案,竞猜结束。

    CE
    基础知识系列(3):各种电泳模式的应用

    由于各种原因导致本系列到现在才能跟大家见面,sorry N次方。
    本期的基础知识将从电泳模式的选择角度来谈CE的应用,不设再设奖品(加分)。


    毛细管电泳模式的选择,可以有不同的原则,比如简单性、目的性、普适性、选择性、样品的特异性等。

    以简单性为原则时,所选分离模式的操作、条件优化、分离控制等必须是最简单和最容易的,而且富于后续变化。根据这已道理,首先应该考虑自由溶液分离模式,最后才考虑填充形式的分离模式(图1)。简单原则是毛细管电泳模式的一般规则。



    1 CE分离模式选择流程



    在分离生物样品时,通常需要根据分离的目的来选择分离模式:欲测定样品的尺寸,就须选择非胶筛分毛细管电泳(
    NGCE)或毛细管凝胶电泳(CGE),偶而可选用区带电泳(CZE)或胶束电动色谱(MEKC);要测定样品的等电点的话则应选用毛细管等电聚焦电泳(CIEF);在进行亲和作用研究时,则应首选亲和毛细管电泳(ACE)。

    我们的分析目的可能并不是单一的,这时的分离模式选择,就应该注意考虑其通用性。CZEMEKC和毛细管电色谱(CEC)的通用性和可调节性都较大,但根据简单性原则,还以CZEMEKC为优。注意,填充型毛细管电泳不适用于颗粒样品的分离,甚至也不适用于大分子分离。

    有时候,我们会特别注重分离的选择性,即只希望把目标组分分离出来。此时应优先考虑选择性高的分离模式,如ACE等。如果已知样品的某些特性,也可以根据此选择分离模式。比如在分离蛋白质和多肽等两性样品时,可以优先考虑CIEF;在分离中性分子时,优先考虑MEKC;在分离水难容组分时,优先考虑沸水毛细管电泳形式等。

    总的来说,CZE最简单,最稳定,容易控制,适用性广。广泛用于药物、环境、农药、食品等领域中,实现醇、黄酮、喹啉、酚等有机化合物的分离。但是对于复杂组分,CZE常常会表现得无能为力。由此才衍生出了那么多种类的分离模式。但并不是说,某种类型的物质只能对应单一种分离模式。比如手性分离,CZE(使用添加剂如手性金属络合物、手性冠醚、环糊精及其衍生物等)、MEKCCGECEC都可以实现。对蛋白质分析,一般选择NGCENGCEACE等。DNA碎片分离可以采用任何模式,而尺寸分离则使用CGENGCE。糖及其缀合物的分析首先需要解决电荷问题。一般采用络合法、强碱电离或衍生使其带电。电荷问题解决后基本CZE就可以将其分离。

    本期内容大多总结自《毛细管电泳技术及应用》(陈义编著,化学工业出版社,2000年)

    上期两期主题:

    CE基础知识系列(1):CE电泳模式

    http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20120316/3926304/

    CE基础知识系列(2):各种电泳模式的分离原理

    http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20120327/3947187/

    下期预告:
    CE基础知识系列(4):各种CE装置的介绍
  • 该帖子已被版主-老多_小多加15积分,加2经验;加分理由:辛苦
    +关注 私聊
  • yuduoling

    第1楼2012/04/18

    这个系列帖子非常好,将CE基础知识重新梳理,起到基础知识系统化并达到普及的效果

0
    +关注 私聊
  • 老多_小多

    第2楼2012/04/18

    买一台仪器,这些模式都具备吗?还是要选择呀?

0
    +关注 私聊
  • nini2006

    第3楼2012/04/18

    大多数没问题,不过也有例外的。比如有些仪器就叫毛细管电色谱仪,那就只能用电色谱模式了。有些还得结合检测器来看你的分离模式。比如电致化学发光检测器的局限性就很大,很多用于提高分离度的添加剂本身就有电致化学发光响应。

    老多_小多(emoc98311) 发表:买一台仪器,这些模式都具备吗?还是要选择呀?

0
    +关注 私聊
  • ybw354

    第4楼2012/04/18

    CZE最简单,最稳定,容易控制

0
    +关注 私聊
  • nini2006

    第5楼2012/04/18

    呵呵,同意吗?

    ybw354(ybw354) 发表:CZE最简单,最稳定,容易控制

0
    +关注 私聊
  • ericwong

    第6楼2012/04/19

    CZE是最简单,不过影响因素也是很多的。
    只是一个毛细管内壁吸附就会搞得晕头晕脑的。

0
    +关注 私聊
  • 果果

    第7楼2012/04/19

    回复楼上:CZE吸附问题多用涂覆的方式 特别是分离碱性蛋白质的时候

0
    +关注 私聊
  • 935435728abc

    第8楼2012/04/19

    我喜欢,找了好久关于电泳的理论

0
    +关注 私聊
  • nini2006

    第9楼2012/04/19

    yes, 100% support you!

    果果(gxm-430072) 发表:回复楼上:CZE吸附问题多用涂覆的方式 特别是分离碱性蛋白质的时候

0
    +关注 私聊
  • nini2006

    第10楼2012/04/19

    PS: failed to use the chinese input today. What a tragedy! How am I supposed to do my daily work in this forum by this way?!

0
查看更多
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
举报帖子

执行举报

点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...